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目的:胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,虽然胃癌发生发展机制尚不清楚,但是普遍认为,癌细胞的浸润和转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。近年来,大量的研究认为胃癌等上皮源性肿瘤发生上皮间质转化(EMT)是导致肿瘤转移的重要环节。在EMT过程中,细胞侵袭迁移能力增强,同时还可使肿瘤细胞获得干细胞的特性,进一步促进肿瘤的侵袭转移。高迁移率族蛋白A2(HMGA2)是一种标志性的转录因子,它在很多恶性肿瘤的发生及发展中起着重要的作用。胃癌中高表达的HMGA2与肿瘤的转移密切相关,而且是一个独立的预后因素。其原因可能与HMGA2能促进肿瘤发生EMT有关,但是其转移的关键机制目前尚不清楚。近年来TWIST蛋白是被重新认识的与EMT相关的重要转录因子,包括TWIST1和TWIST2两个亚型,其中TWIST1与肿瘤转移和血管生成拟态形成的关系最为密切。TWIST1的过度表达与肿瘤的不良预后和高侵袭转移率相关。研究显示TWIST1参与了结直肠癌恶性进展,然而目前其参与胃癌发生的证据较少。前期研究发现HMGA2诱导胃癌细胞发生 EMT与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关,并通过染色质免疫沉淀(ChIP)技术从ChIP-on-chip芯片中筛选出了与胃癌细胞发生EMT相关的TWIST1基因。我们推测HMGA2可能通过调控下游靶基因TWIST1来影响EMT发生及肿瘤细胞干性获取。因此,本研究主要探讨在胃癌中HMGA2与TWIST1之间的关系以及HMGA2是否可以通过调控TWIST1来影响胃癌细胞的侵袭迁移能力、EMT发生及肿瘤细胞干性获取。 方法:⑴通过免疫组化和 western blot方法检测HMGA2及TWIST1在胃癌及癌旁组织中的表达水平;采用western blot方法检测HMGA2及TWIST1在不同胃粘膜上皮来源细胞株中的表达水平。⑵通过western blot方法检测在低分化胃癌细胞株MKN-45中,干扰 HMGA2后 TWIST1蛋白的表达变化;在中分化胃癌细胞株SGC-7901中,过表达HMGA2后TWIST1蛋白表达变化;通过双荧光素酶报告基因实验,验证TWIST1是否是HMGA2的直接下游靶基因。⑶在MKN-45中干扰 HMGA2的同时过表达 TWIST1、在SGC-7901中过表达HMGA2的同时干扰TWIST1之后,通过transwell法、wound healing及western blot方法检测胃癌细胞侵袭迁移能力、EMT及干性标志物表达的变化。⑷在MKN-45中干扰HMGA2的同时过表达TWIST1,然后通过活体成像实验检测胃癌细胞在体转移能力的影响。 结果:①HMGA2和TWIST1在胃癌组织中的表达均较高,二者呈正相关,而且高于癌旁组织;HMGA2和TWIST1在低分化胃癌细胞株中表达较高,在高分化及中分化胃癌细胞株中表达较低,在永生化胃上皮细胞株中未表达。②干扰及过表达HMGA2后,TWIST1的蛋白表达相应下降及升高;HMGA2能够明显提高TWIST1的启动子活性。③在MKN-45中干扰HMGA2的同时过表达TWIST1,可以回复HMGA2干扰后对胃癌细胞侵袭迁移能力、EMT及干性标志物表达的抑制作用;在SGC-7901中过表达HMGA2的同时干扰TWIST1,可以回复HMGA2过表达后对胃癌细胞侵袭迁移能力、EMT及干性标志物表达的促进作用。④裸鼠转移瘤实验发现,在MKN-45中干扰HMGA2的同时过表达TWIST1,可以回复干扰HMGA2后对胃癌细胞转移能力的抑制作用。 结论:胃癌中HMGA2与下游靶基因TWIST1之间存在正性调控关系,HMGA2可以直接调控TWIST1的表达来影响胃癌的侵袭迁移能力和胃癌细胞的EMT发生及干性获取。