抗结核药物性肝损伤患者血清中hsa_circ_0082152的差异表达及其对炎症因子的调控作用

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目的基于前期在抗结核药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced liver injury,ADLI)患者与非ADLI患者以及ADLI细胞模型进行的circRNAs表达谱检测结果,筛选并验证差异表达circRNA hsa_circ_0082152,通过人群研究和细胞实验探讨其对炎症因子的调控机制。方法(1)人群研究:选取2020年8月至2020年12月在河北省石家庄市第五医院确诊为肺结核病的初治住院患者238例,分为损伤组(108例)和非损伤组(130例)。(2)细胞学实验:联合使用抗结核药物(异烟肼、利福平、吡嗪酰胺)建立ADLI细胞模型,分为对照组,药物组,hsa_circ_0082152过表达和敲减组,异粘蛋白(metadherin,MTDH)敲减组;HE染色观察肝细胞病理学改变;RNase R、放线菌素D实验检测hsa_circ_0082152的稳定性;RPISeq软件预测hsa_circ_0082152与MTDH的相互作用,RNA结合蛋白免疫沉淀实验、RNA荧光原位杂交联合免疫荧光实验验证hsa_circ_0082152和MTDH的结合作用。(3)指标检测:q RT-PCR法检测hsa_circ_0082152、MTDH、NF-κB、IL-1β、TNF-α的m RNA水平;酶联免疫吸附实验检测ALT、AST以及NF-κB、IL-1β、TNF-α的蛋白;蛋白免疫印记实验检测各组细胞NF-κB、MTDH的蛋白。(4)统计学分析:t检验、χ~2检验、方差分析判断组间差异;Pearson相关分析各指标间的相关性。结果(1)人群研究:hsa_circ_0082152在肝损伤组患者血清中的表达高于非肝损伤组(P<0.05),并且肝功能指标(ALT、AST、ALP、TBIL)、炎症指标(CRP、LDH)和炎症因子(NF-κB、IL-1β、TNF-α)在肝损伤组患者血清中也表达上调(均P<0.05);hsa_circ_0082152与肝功能指标、炎症指标、炎症因子均呈正相关(均P<0.05)。(2)细胞学实验:hsa_circ_0082152具有较高稳定性,主要存在于细胞质中,在药物组中表达上调;药物组肝细胞较对照组受损明显,ALT和AST以及NF-κB、IL-1β、TNF-α含量均明显升高(P<0.05);与药物组相比,过表达hsa_circ_0082152会促进肝损伤过程中的炎症反应,敲减hsa_circ_0082152则会抑制肝损伤过程中的炎症反应;hsa_circ_0082152可以通过与MTDH结合增加了NF-κB m RNA的稳定性,进而调控ADLI过程中的炎症反应。结论(1)hsa_circ_0082152在肝损伤患者血清中显著高表达,且与肝功能指标、炎症指标、炎症因子均呈正相关,提示hsa_circ_0082152可能通过调控NF-κB炎症通路影响ADLI的发生。(2)hsa_circ_0082152可能通过结合MTDH正向调控NF-κB信号通路进而促进ADLI过程中的炎症反应。图12幅;表16个;参157篇。
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