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研究背景肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。在我国,肺癌的发病率在逐年上升,已成为我国城市和农村人口癌症死亡的首位原因。肺癌主要病理类型包括:非小细胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC）和小细胞肺癌（Small Cell Lung Cancer,SCLC）;其中NSCLC为主要类型,占80%-85%,2/3的患者在就诊时即为晚期,失去根治性治疗的可能。MicroRNA（miRNA）是一类非编码小RNA,长度一般是19-23个核苷酸序列。miRNA与其对应靶mRNA通过完全或不完全碱基互补配对进行结合,导致靶mRNA降解从而抑制靶蛋白的翻译。研究表明,miRNA在诸多生物过程中发挥作用,参与调控肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡、分化以及上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）等。miRNA 常作为原癌基因或者肿瘤抑制基因起作用,其对于肺癌的发生发展、诊断、治疗和预后方面均发挥了重要作用。miR-512-3p 和 miR-512-5p 是 miR-512 家族的成员之一,miR-512-3p 和miR-512-5p在NSCLC中的具体作用及机制尚需进一步探讨。本研究共分三部分进行:第一部分:miR-512-3p和miR-512-5p在非小细胞肺癌细胞转移中的功能研究首先,我们发现miR-512-3p和miR-512-5p在NSCLC患者肿瘤组织中显著低表达;我们采用microRNA表达谱芯片,探索了 RA（维甲酸）刺激NSCLC细胞系A549、H1299后的miRNAs表达差异,结果提示:与对照组相比,RA处理组miR-512-3p和miR-512-5p的表达升高。进一步采用RT-PCR验证RA处理后的A549、H1299 中 miR-512-3p 和 miR-512-5p 表达水平,证实 RA 诱导 miR-512-3p 和 miR-512-5p表达上调。我们进一步对A549及H1299细胞株进行质粒瞬时转染,过表达miR-512-3p或miR-512-5p,结果提示:过表达miR-512-3p能够显著降低肿瘤细胞间粘附、抑制细胞迁移和侵袭,但细胞增殖无显著变化;miR-512-5p促进A549和H1299细胞凋亡、抑制细胞的有氧糖酵解,并抑制A549细胞迁移,但A549及H1299细胞增殖无显著变化。瞬时转染miR-512-3p inhibitor至稳定过表达miR-512的H1299细胞（H1299-miR-512）后,细胞粘附、迁移和侵袭能力都有显著提高,提示miR-512-3p和miR-512-5p参与调控肿瘤细胞粘附、细胞迁移和侵袭,以及细胞凋亡。因此我们推测,miR-512-3p和miR-512-5p在NSCLC细胞发生转移过程中起重要作用。第二部分:miR-512-3p和miR-512-5p通过调控DOCK3和P21影响非小细胞肺癌细胞的转移我们采用双荧光检测和western blot,进一步发现DOCK3是miR-512-3p的一个靶基因。通过RNA干扰技术（RNAi）,采用DOCK3 siRNA敲除A549、H1299细胞DOCK3的表达,发现肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭能力均降低。DOCK3 siRNA能够逆转miR-512-3p inhibitor对H1299-miR-512细胞粘附、迁移和侵袭的上调作用。我们通过序列匹配法预测p21可能是miR-512-5p的一个靶基因,进一步通过双荧光检测、qRT-PCR和western blot,发现过表达miR-512-5p显著降低野生型p21-3’UTR荧光报告质粒的荧光值,降低p21 mRNA水平及p21蛋白表达水平,确证p21是miR-512-5p的一个靶基因。进一步通过p21 siRNA,发现敲除p21,促进A549和H1299细胞凋亡、抑制细胞有氧糖酵解。此外,在H1299-miR-512中,miR-512-5p inhibitor降低细胞凋亡,p21 siRNA则逆转miR-512-5p inhibitor对H1299-miR-512凋亡的抑制作用。提示miR-512-3p和miR-512-5p通过调控DOCK3和p21蛋白表达,参与调控肿瘤细胞粘附、细胞迁移和侵袭,以及细胞凋亡。第三部分:miR-512-3p和miR-512-5p表达影响晚期转移性非小细胞肺癌患者生存及预后目的:晚期非小细胞肺癌患者生存及预后仍很差,多种因素均会影响患者的生存及预后。含铂双药化疗是晚期非小细胞肺癌患者的标准一线治疗模式。本研究的目的旨在探索miR-512-3p和miR-512-5p表达对接受一线化疗的NSCLC患者生存及预后的影响。研究方法:收集我院2016年01月-2017年06月晚期NSCLC一线接受化疗的患者,通过RT-PCR的方法检测肿瘤活检组织标本中miR-512-3p和miR-512-5p的表达情况,并分析miR-512-3p和miR-512-5p的表达对化疗疗效、生存、预后的相关性。结果:本研究共纳入91名患者。中位随访时间为35个月（30.0～46.6个月）。miR-512-3p和miR-512-5p表达与NSCLC的T分期、N分期以及M分期有关,miR-512-3p和miR-512-5p低表达患者的T分期更高、N分期更高,伴随更高的脑、肝脏转移发生率。与miR-512-3p低表达患者相比,miR-512-3p高表达患者有更高的 ORR（26.8%vs.22.0%,p=0.06）,更长的 PFS（5.1 vs.4.6 个月,p=0.13）和OS（15.8vs.10.8 个月,p＜0.01）。与 miR-512-5p低表达患者相比,miR-512-5p 高表达患者也有更高的ORR（27.2%vs.22.3%,p=0.05）,更长的PFS（5.1 vs.4.6个月,p=0.21）和OS（15.9 vs.10.8个月,p＜0.01）。回归分析进一步证实miR-512-3p和miR-512-5p是OS的独立预测因素。结论:miR-512-3p和miR-512-5p高表达是晚期NSCLC患者总生存的独立预测因素,与更长的生存时间相关。