梨果实蔗糖积累关键基因的筛选

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本文通过转录组学分析及生物信息学分析的方法,对不同蔗糖积累型梨果实进行转录组数据分析与WGCNA共表达网络分析,以及对梨中SUS及SPS基因家族进了鉴定及表达分析,并鉴定了参与蔗糖代谢的关键模块与关键候选基因。主要结果如下:1.不同蔗糖积累型梨品种的转录组数据分析本研究对两个不同蔗糖积累型梨品种的三个关键发育时期进行转录组数据分析,利用实时荧光定量PCR技术对转录组数据进行了验证。结果表明,每个样品的Q20均能达到95%以上,与参考基因组的匹配率在72.55%至77.41%之间,且每个时期的基因表达重复性达到95%以上,通过随机挑选12个基因进行荧光定量PCR验证,发现与转录组变化相一致,表明此次转录组测序结果可靠。通筛选发现共有11868个差异基因,且PbrSUS2,PbrSUS15,PbrSPS3、PbrSPS8,PbrFRK3,PbrSWEET6 与两个品种的蔗糖代谢趋势一致,可能是参与蔗糖代谢的关键候选基因。2.WGCNA鉴定参与蔗糖代谢的关键模块与关键候选基因运用WGCNA的分析方法,对差异基因进行表达模块的分类,并对候选模块进行GO和KEGG富集分析及网络构建和转录因子的筛选,以及对关键候选基因的启动子序列进行转录因子结合位点和调控元件预测。结果表明,共检测出13个模块,其中green模块为此次筛选的关键候选模块,其中有5个参与蔗糖代谢的差异基因富集在蔗糖代谢通路中,且有20个差异基因富集在信号转导通路中。模块包含42个转录因子,分布在22个家族中。有6个家族的转录因子能够和蔗糖代谢基因与信号转导基因构建调控网络。通过调控网络分析鉴定出可能参与蔗糖代谢的关键候选基因(PbrSUS2,PbrSPS3,PbrSPS8 和 PbrFRK3)和转录因子(ERF,C2H2-1,C2H2-2,bZIP),为进一步筛选调控蔗糖代谢关键基因提供重要依据。3.SUS及SPS基因家族鉴定及表达分析本研究对梨蔗糖合酶(SUS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因家族进行全基因组鉴定与基因结构、系统发育关系、蛋白质保守功能域、染色体定位和基因进化模式分析,利用转录组数据和实时荧光定量PCR技术分析低蔗糖型‘砀山酥梨’和高蔗糖型‘翠冠’果实发育过程中SUS和SPS家族基因的表达模式。结果表明,梨中包含17个SUS基因(PbrSUS1-PbrSUS17)和8个SPS基因(PbrSPS1-PbrSPS8);SUS基因家族分为3个亚家族,分别为SUS1、SUSA和SUS2。梨SUS和SPS基因家族成员不均匀地分布在10条染色体上,主要通过片段复制事件进行扩张,且在进化过程中主要受纯化选择作用。PbrSPS3、PbrSPS4、PbrSPS8、PbrSUS2和PbrSUS15可能是调控梨果实蔗糖合成积累的重要基因。
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