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背景和目的: 非酒精性脂肪肝(NAFLD)主要包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎以及脂肪性肝纤维化。虽然目前关于NAFLD确切的发病机制仍不清楚，关于其病理生理过程较为广泛接受的是“二次打击”学说。目前对于NAFLD还没有批准的药物治疗方案，生活方式干预仍旧是目前主要的治疗方式。人体及动物实验研究表明，包括控制体重、营养干预在内的健康的生活方式对非酒精性脂肪的治疗都是有益处的。长期服用绿茶及鞘脂类提取物n-3多不饱和脂肪酸对NAFLD有保护作用。 瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)为一种非选择性阳离子通道，可传递有害性的热和疼痛信号。TRPV1在感觉神经中表达较高，同时也表达在血管系统、脂肪以及肝脏组织中。辣椒素是辣椒辛辣的主要成分，也是TRPV1的激动剂。我们前期工作发现长期膳食辣椒素干预可有效降低遗传性高血压大鼠的血压，并且有预防肥胖的作用。近期体外及在体研究表明，过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）可调节肝脏细胞的脂质生成过程。利用药物激活PPARδ可改善由高脂饮食诱导的糖尿病小鼠的肝脏的脂肪变性。自噬功能的异常可造成细胞内脂质代谢的失衡。一些研究表明肥胖人群脂肪组织的自噬上调，并且肝脏自噬功能受损可促进氧化应激，引起胰岛素抵抗。因此，我们提出假设，膳食辣椒素激活TRPV1，通过促进PPARδ介导的自噬功能增强来改善NAFLD。 在本研究中，我们探讨膳食辣椒素对NAFLD的影响以及其中涉及到的TRPV1活化的分子机制。我们首先通过利用游离脂肪酸干预的HepG2细胞以及高脂饮食喂养的野生型小鼠和TRPV1基因敲除小鼠模型，确定辣椒素激活TRPV1通道对脂滴沉积的影响。然后我们分别利用在有无辣椒素干预情况下的细胞及动物模型，检测与脂质代谢及自噬相关蛋白的表达情况。我们同时检测了膳食辣椒素激活TRPV1通道对肝脏炎症状态的影响。 材料和方法: 本研究包括在体及体外实验两部分。在体实验模型包括普通饲料、高脂饲料以及高脂加辣椒素饲料喂养的野生型小鼠和TRPV1基因敲除小鼠。体外实验采用加有游离脂肪酸干预、游离脂肪酸加辣椒素干预以及游离脂肪酸加有辣椒素和辣椒卓平干预的培养的HepG2细胞。 1.利用油红O染色观察HepG2细胞中的脂滴。细胞内甘油三酯及游离脂肪酸定量分析均严格按照试剂盒说明书进行。 2.HepG2细胞及小鼠肝脏组织TRPV1蛋白及mRNA表达采用免疫斑点及RT-PCR检测。 3.HSL、p-HSL、CPT1, ATGL, FAS, SREBP-1, PPARα, PPARδ, LXR, LC3Ⅰ, LC3Ⅱ,Beclin1，Atg5和Atg7蛋白表达测定均采用免疫斑点方法。 4.小鼠肝脏组织脂滴沉积情况利用HE染色进行观察。 5.小鼠肝脏组织TNF-α水平严格按照ELISA试剂盒说明书进行。 6.血ALT和AST检测严格按照试剂盒说明书进行。 结果: 1.游离脂肪酸干预培养的HepG2细胞胞内脂滴沉积明显增多，而辣椒素可抑制此过程。应用TRPV1拮抗剂辣椒卓平后上述辣椒素的作用消失。 2.辣椒素干预可逆转FFA诱导的HepG2细胞TRPV1表达下调，加入辣椒卓平后上述作用消失。 3.在野生型小鼠，长期辣椒素干预可有效预防高脂饮食造成的肝脏TRPV1表达的下调，并且预防脂肪肝的形成。而TRPV1基因敲除小鼠中辣椒素无作用。 4.长期膳食辣椒素可上调野生型小鼠HSL、p-HSL和CPT1的表达水平，但在TRPV1基因敲除小鼠中无作用。 5.高脂饮食诱导野生型和TRPV1基因敲除小鼠PPARα和LXR表达上调，此过程不受辣椒素影响。膳食辣椒素可显著上调高脂喂养野生型小鼠PPARδ的表达水平，但对TRPV1基因敲除小鼠无作用。 6.游离脂肪酸介导的自噬抑制过程可被GW0742所逆转，其自噬抑制作用可在GSK0660干预下进一步加重。 7.辣椒素干预可提高HepG2细胞的自噬作用，并且可在GW0742干预下进一步增加。辣椒卓平抑制自噬作用，并且在GSK0660作用下进一步加重。 8.辣椒素干预并不影响游离脂肪酸培养的HepG2细胞PPARα的表达水平。PPARα的拮抗剂GW6471可降低培养的HepG2细胞胞内甘油三酯含量，但对LC3Ⅱ的表达无影响。 9.长期高脂饮食可显著降低野生型小鼠肝脏组织PPARδ和自噬相关蛋白的表达水平，但此过程可被辣椒素所逆转。辣椒素的上述作用对TRPV1基因敲除小鼠无作用。 10.膳食辣椒素可显著降低高脂饮食饲养野生型小鼠血中ALT和AST水平，以及肝脏TNF-α的表达。上述辣椒素作用对TRPV1基因敲除小鼠无效。 结论: 1.辣椒素通过激活TRPV1介导的脂解作用预防培养的HepG2细胞及肝脏组织中脂滴的沉积。 2.膳食辣椒素激活TRPV1，通过增强PPARδ介导的自噬作用来影响肝脏的脂质沉积。 3.长期膳食辣椒素通过TRPV1依赖的方式改善肝脏脂肪变性及炎症反应。