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原发性肝癌是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的恶性肿瘤,其中肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)约占原发性肝癌发病率的90%。HCC病程具有进展速度快、转移率及复发率高的特点,是国内外对于HCC的诊治效果不理想的主要原因。中国作为肝癌的高发病率国家,患者人数仍在上升。截止目前为止,国内外治疗肝癌的手段主要包括手术、放化疗以及肝移植、靶向治疗、免疫治疗、中医药治疗等,但早期肝癌的主要治疗手段仍以手术为主。而导致肝癌患者死亡的最主要和最常见的原因是术后复发。因此保持肝癌术后休眠状态,抑制其复发,可有效地降低死亡率,从而提高生存期。目的:本课题预测肝癌细胞系SMMC7721中mi R-602表达的变化,可通过调节RASSF1A基因介导的磷酸化JNK信号通路促进癌细胞凋亡的作用,从而影响肝癌术后复发。方法:体外细胞实验部分:构建稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞系,在此基础上,进行mimic及inhibitor mi R-602的瞬时转染实验。通过检测各细胞系中mi R-602、RASSF1A与p-JNK、JNK、ATF-2和c-JUN、p-C-JUN的表达,阐明在细胞中mi R-602调控RASSF1A/JNK信号通路的作用机制。体内动物实验部分:用稳定转染RASSF1A的SMMC7721细胞系建立原发性肝癌术后休眠裸鼠模型的基础上,运用RT-q PCR、WB、病理学切片、细胞转染等技术,探讨裸鼠肝脏肿瘤组织中mi R-602表达水平及RASSF1A表达情况,以及检测下游JNK信号通路的相关蛋白p-JNK、ATF-2、c-JUN、p-C-JUN等,对原发性肝癌术后复发机制进行研究。通过上述研究阐明裸鼠体内mi R-602表达对RASSF1A及磷酸化JNK通路的影响从而干预肝癌术后复发的机制。结果:细胞实验:稳转RASSF1A基因SMMC7721细胞实验后,通过细胞免疫荧光、RT-q PCR及WB证明RASSF1A具有肿瘤抑制作用。与mimic NC组相比,在瞬时转染的mi R-602 mimic组细胞生长密度更高,RASSF1A的表达明显降低,表明增加的mi R-602抑制了RASSF1A的表达,并且这种低表达水平消除了对JNK的磷酸化抑制作用并增加了JNK的表达。相应的下游ATF-2和p-C-JUN,C-JUN蛋白表达水平也升高。inhibitor和inhibitor NC组的结果与mimic组相反。体内实验:裸鼠成瘤实验稳定表达RASSF1A基因的SMMC7721细胞组的小鼠原发肿瘤体积较小,复发肿瘤局限于右下半肝且体积较小。对原发及复发肿瘤组织行病理切片、RT-q PCR及WB分析证实,RASSF1A的表达与p-JNK、JNK、ATF-2和c-JUN、p-C-JUN的表达呈负相关。结论:mi R-602可能抑制RASSF1A的表达,而低表达的RASSF1A可以解除对磷酸化JNK信号通路的抑制,从而促进肝癌术后复发。肝癌细胞中mi R-602的过表达与术后复发密切相关,可能作为判断肝癌患者预后的指标。