研究背景及目的：膀胱癌是我国泌尿外科临床上最常见的恶性肿瘤之一，占全部恶性肿瘤的1%-2%，其发病率与死亡率均占泌尿系肿瘤的首位，是一种直接威胁患者生存的疾病。近年来，我国膀胱癌发病率呈增长趋势。膀胱癌初诊患者中70-80%为浅表性肿瘤（临床分期Ta-T1）。目前临床上治疗膀胱癌主要以手术为主，辅以膀胱内灌注化疗及生物制剂治疗。膀胱癌的转移和复发是膀胱肿瘤患者致死的主要原因之一。虽然目前临床可以很好的控制膀胱癌，但是其5年复发率高达26–44%（T4），40–64%（T3），52–77%（T2）。系统性化疗主要是针对肌肉浸润性和转移性膀胱癌的首选治疗方案，系统化疗能改善进展期或转移性膀胱癌的预后，延长患者生存时间。但是以MVAC（甲氨蝶呤、长春碱、多柔比星、顺铂）和GC（吉西他滨、顺铂）方案为代表的膀胱癌联合化疗方案具有毒副作用大、长期预后欠佳等不足。所以发现新的膀胱癌诊断及治疗方法变得尤为重要，而基因治疗是近年来研究的非常多的一种诊断治疗方法。NDRG2是N-MYC下游调节基因（N-myc Downstream Regulated Gene，NDRG）家族的重要成员之一，人源NDRG2是我校生化教研室首先发现并被命名的（AF159092），它最初是在N-Myc基因敲除小鼠中发现的，随着对其研究及其机制的不断深入，NDRG2在多种不同类型的肿瘤中表达水平较正常组织是降低的，例如：前列腺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌及肾癌等，且与正常组织的NDRG2蛋白表达呈负相关。这些研究说明了NDRG2对肿瘤起着一定的抑制作用。并且，最新的研究发现，过表达NDRG2可以抑制肝癌细胞的转移以及乳腺癌的淋巴节转移，上调NDRG2表达后，在动物体内，可发现其抑制前列腺癌的骨转移。这些证据均表明，NDRG2在肿瘤的形成中发挥着重要的作用，NDRG2可能参与了肿瘤的发生、发展等。目前NDRG2基因在泌尿系肿瘤中的前列腺癌和肾细胞癌中被证实具有抑制癌细胞生长及转移的作用，但是在膀胱癌表达方面未见相关的研究报道，因此本研究旨在进一步探讨该基因在膀胱肿瘤组织中的表达情况，以及NDRG2对膀胱癌细胞的增殖、凋亡以及转移的影响，为临床诊断和治疗膀胱癌提供一定的依据。研究方法及内容：本研究通过检测NDRG2在正常膀胱组织和肿瘤中表达水平，观察其对人膀胱癌增殖、凋亡和转移能力的影响。初步了解NDRG2在膀胱癌发生、发展中的作用。本研究包括以下三方面内容：1．应用免疫组化方法检测NDRG2在膀胱组织中表达情况以及与c-Myc之间表达的关系。采用免疫组织化学方法对112例膀胱（15例膀胱正常组织，97例膀胱肿瘤组织）组织标本进行S-P法染色，然后显微镜下观察染色情况，检测NDRG2在膀胱正常组织和膀胱肿瘤组织中的表达差异情况，以及NDRG2与c-Myc、临床病理分期、年龄和性别之间的相关性。2．慢病毒介导的NDRG2基因对膀胱癌细胞在体外的增殖、凋亡以及侵袭转移的影响。我们以携带人源NDRG2基因的慢病毒载体感染体外培养的T24细胞系。运用PCR和Western-blot方法检测目的基因在膀胱癌T24细胞的表达水平，通过平板克隆实验和MTT实验检测病毒介导的过表达NDRG2对膀胱癌细胞增殖能力的影响；流式细胞仪检测感染前后膀胱癌细胞周期、凋亡的变化有无差异。同时，慢病毒感染后高表达的NDRG2对于周期和凋亡相关蛋白（cyclinD1，CDK4，p21）以及对膀胱癌转移相关蛋白（MMP-2,MMP-9）表达水平的影响，以及Transwell小室实验检测NDRG2对T24细胞在体外对迁移和转移能力的影响。3．NDRG2基因过表达对于膀胱癌细胞体内增殖、凋亡及转移的影响。同周龄雄性裸鼠随机分为两组，每组5只，将慢病毒介导的实验组LEN-NDRG2细胞及对照组LEN-Lacz细胞在裸鼠腋下注射成瘤，然后检测肿瘤生长曲线，肿瘤大小达到300mm3后，脱颈法处死裸鼠，检测瘤体生长比率以及有无淋巴结的转移等，肿瘤组织提取蛋白，检测肿瘤周期凋亡相关蛋白（cyclinD1，CDK4，p21）和转移相关蛋白（MMP-2，MMP-9）的表达水平两组之间有无差异。实验结果：实验结果表明NDRG2在膀胱肿瘤组织中的阳性表达率和表达水平均低于膀胱正常组织(χ2=8.761, p＜0.01)，并且NDRG2的表达与病理组织病理分级呈负相关(r=-0.248,p<0.05)，这提示NDRG2可能与膀胱肿瘤的组织病理分期有一定的相关性，而与性别、年龄无明显相关性；且NDRG2与c-myc表达呈负相关(-0.454, p <0.001)。膀胱癌细胞系中的NDRG2蛋白和mRNA的表达水平均低于正常膀胱上皮细胞，尤以T24最低。慢病毒感染T24细胞，稳转细胞系构建成功，NDRG2过表达可以抑制T24细胞的增殖、促进凋亡，并且对膀胱癌T24细胞的转移和侵袭能力有一定的抑制作用，体内、体外实验结论相同。结论与提示：NDRG2可能参与了膀胱癌的发生和发展，膀胱癌中NDRG2低表达，我们通过慢病毒感染使NDRG2过表达，可以抑制膀胱癌T24细胞的增殖，促进凋亡，对转移和侵袭有一定的抑制作用，在体内和体外的结论相同。这些实验结果表明NDRG2有可能成为膀胱癌诊断和治疗的新靶点。