桃果实的甜酸是影响其风味品质和经济价值的重要因素，它是杂交育种选择中一个重要的衡量标准。在以往的研究中，对果实甜酸性状的遗传知识一直非常有限。控制桃果实非酸（non-acid）性状的是显性主基因D，但目前尚未有与该基因紧密连锁分子标记的报道。本实验利用RAPD、AFLP分子标记，以京玉、美味正反交F1代69株群体为试材，对桃果实的非酸／酸性状进行研究，同时以大久保、兴津油桃杂交F2代109株群体为试材，构建桃的分子标记连锁图谱。主要研究结果如下： （1） 利用RAPD标记筛选桃果实非酸／酸性状近等基因池，301个随机引物中只有引物S332在两基因池间产生的多态性片段与目标性状共分离，但重组率较高，为28.9％。RAPD标记的低多态检出率表明其不是筛选与该目标性状紧密连锁标记的理想方法。 （2） 建立稳定、高效的桃AFLP分析体系：制备高质量的基因组DNA是AFLP技术中非常关键的步骤。预扩增引物可选择E+0／M+0或E+0／M+C组合，对扩增条带数的影响不显著；选择性扩增引物组合E+2／M+3、E+3／M+3都适合桃比较基因组研究，但从揭示的多态性来说还是前者较高。本实验采用银染显色法对AFLP扩增产物进行检测，银染显色具有避免同位素污染、成本低、检测时间缩短、染色后可长期保存、便于目的片段的回收等优点，是一种安全、快速而有效的方法。 （3） 利用AFLP技术与BSA相结合的方法筛选与桃果实非酸／酸（non-acid／acid）性状连锁的分子标记，128对AFLP引物组合中有3对引物产生的多态性片段与目标性状发生共分离。其中与D／d基因隐性位点紧密连锁的两个标记，分别来自引物组合E-TA／M-CTA、E-AT／M-CTA，连锁距离分别为1.47cM，2.99cM；引物组合E-ACT／M-CAT扩增的多态性片段与D／d基因显性位点连锁，连锁距离为16.2cM。 （4） 构建D／d基因连锁群，在筛选到的标记中，连锁距离最近的两个标记AFTA／CTC、AFAT／CTA分别位于D／d基因位点的两侧。 （5） 将三个多态性片段分别克隆、测序，测序结果表明特异片段A、B、C均来自于EcoRI与MseI两内切酶酶切片段，大小依次为140bp、199bp、408bp，利用序列分析软件推测片段B、C中可能含有与糖水平调控作用相关的元件。根据特异片段的序列信息设计特异引物：A1／A2、B1／B2、C1／C2，用这三对特异引物对分离后代的基因组DNA进行PCR扩增。结果发现引物B1／B2在果实性状表现为酸的后代个体中同时扩增出分子 吴俊：桃果实非酸／酸性状分子标记的筛选及遗传连锁图的构建量大小为 188hp和 158hp的两条带，而非酸个体只有分子量大小约 188hp的单条带扩增，可见 15 sbp的条带是转化的特异片段；分离群体验证结果与 MLP的结果一致，从而实现了片段B向SCAR标记的转换。特异引物AI／AZ、CIc的扩增产物在亲本及后代中多态性消失。 “)用转化的 SCAR引物 BIAsZ在大久保 X兴津油桃 FZ部分单株中验证，结果表明基因型与性状表达相符合。该SCAR标记为共显性标记，能够区分纯合体与杂合体。 门)以大久保、兴津油桃FZ代109株群体为试材，采用AFLP、RAPD、SSR、SCAR标记构建桃遗传连锁图。利用128对AFLP引物组合、87个RAPD引物、16对SSR引物、3对SCAR引物对亲本进行多态性分析，选择扩增稳定。多态性丰富的引物 （包括 36对 AFLP引物组合、3对％R引物、3对 SCAR引物）进行群体分离分析，获得分离标记共136个，卡方检验27个标记发生偏分离。应用Mapmaker分析软件将符合孟德尔遗传的 gi个 AFLP标记、二个％R标记、3个 SCAR标记，构建了包含＊ 个连锁群的连锁图，13个fLP标记未定位在连锁群上。连锁群全长1061．SCM，大约覆盖桃基因组范围的88．5％，最长的连锁群长度为198．4。M，由21个标记组成：最短的连锁群长度为29．7cM，由5个标记组成。平均间距最大的为第8连锁群，间距达18．4CM；平均间距最小的为连锁群 2，间距只有 5．8 CM。11个连锁群的平均长度为 96．5CM，标记’司平均间距为 11．0 CM。与果实毛／油杉（G／g）、白／黄肉（Y／y）、非酸／酸（D／d）性状连锁的SCAR标记分别定位在第3、7、9连锁群上。