恶性肿瘤治疗是世界性难题,早期可手术切除,但晚期主要依靠化疗。近年来发展的饥饿疗法通过减少癌细胞的糖供应来饿死肿瘤,虽取得疗效,但仍存在挑战。肿瘤乳酸对癌细胞因缺糖凋亡有抑制作用,仅阻断糖供应不能彻底杀死癌细胞。同时,堵塞血管后会引起肿瘤因缺氧而激发血管再生,如果不能快速杀死癌细胞,肿瘤血管就会重建。为此,本论文基于饥饿治疗协同化疗策略,构建一种促肿瘤凝血与癌细胞内p H、透明质酸酶（Hyals）双重响应性释药的纳米药物载体,用于乳腺肿瘤治疗研究。纳米载体呈核壳结构,血液循环稳定性和乳腺癌细胞主动靶向性好,可诱发乳腺肿瘤凝血和癌细胞内p H/Hyals双重响应性释药,有效杀死癌细胞,是一种有前景的抗乳腺肿瘤纳米递送系统。具体研究如下:（1）碳酸钙载药纳米粒子的合成与表征通过乳化体系并控制氯化钙和碳酸钠的投料比,制得碳酸钙纳米粒子（Ca CO₃ NPs）。XRD显示Ca CO₃ NPs的晶型为球霰石。DLS测得Ca CO₃ NPs的平均粒径为70.6 nm,PDI为0.17。TEM显示Ca CO₃ NPs为分布均匀的球形粒子。BET测得Ca CO₃ NPs平均孔径为7.81 nm。在DOX:Ca CO₃ NPs=1:1的优化质量投料比条件下,Ca CO₃ NPs的DOX负载量为49%,包封率为98%。体外DOX和Ca²⁺释放试验显示,在模拟血液循环环境（p H7.4）中DOX和Ca²⁺释放均非常缓慢,而在模拟癌细胞内涵体/溶酶体环境（p H5.0）中,48 h内DOX释放约90%,1 h内Ca²⁺释放70%,说明Ca CO₃ NPs的DOX和Ca²⁺释放具有p H敏感性。溶血率测试显示,在0.01～2.0 mg/m L的浓度范围内,Ca CO₃ NPs的溶血率小于2%,说明血液相容性好。体外凝血试验显示,Ca CO₃ NPs在p H7.4时不引起凝血,但在p H5.0时快速凝血,凝血时间为16 min。体外细胞吞噬试验显示,1 h内DOX@Ca CO₃ NPs可被MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞吞噬74～80%,并在内涵体/溶酶体中被酸解快速释放Ca²⁺和DOX,Ca²⁺向细胞外迁移,DOX向细胞核迁移,对两种癌细胞的IC₅₀分别为2.17μg/m L和9.7μg/m L,展现出显著的细胞毒性,但纳米粒子本身对小鼠成纤维细胞NIH3T3无毒。小鼠体内乳腺肿瘤局部注射试验显示,Ca CO₃ NPs可诱发肿瘤血管凝血,且Ca CO₃ NPs浓度越高,凝血越严重。（2）透明质酸的甲基丙烯酸酐与聚乙二醇修饰通过HA的羧基与甲氧基聚乙二醇胺（CH₃O-PEG-NH₂）上的氨基反应制得HA-PEG,然后HA上的6-OH再与甲基丙烯酸酐（MA）反应得到m HA-PEG,¹H-NMR测得PEG取代度为17.2%,MA取代度为22.9%。（3）核壳结构纳米药物载体的制备与性能核层DOX@Ca CO₃ NPs与壳层m HA-PEG复合后经紫外光交联得到核壳结构纳米药物载体DOX@Ca CO₃/m HA-PEG NPs。DLS测得纳米粒子的平均粒径约304.7 nm,Zeta电位约-8.9 m V,TEM显示纳米粒子呈均匀分布的圆球形。TG测得纳米粒子的组成含量,其中核层占70.6%,壳层占29.4%。纳米粒子在0.05～0.30M Na Cl和p H7.4条件下粒径变化小,说明纳米粒子在模拟血液循环的环境下具有较好的稳定性,而在p H5.0和Hyals条件下,纳米粒子的粒径明显增大,说明纳米粒子在模拟癌细胞环境中不稳定,具有p H和Hyals响应性。体外DOX与Ca²⁺释放结果显示,在模拟血液循环条件（p H7.4）下,DOX与Ca²⁺释放非常缓慢,而在模拟癌细胞微环境（p H5.0/Hyals）条件下,纳米粒子分解成碎片,DOX在48 h内释放约80%,Ca²⁺在0.5 h内释放约60%,显示出明显的p H5.0/Hyals响应性。体外凝血试验显示,纳米粒子在p H7.4下不引起凝血,但随着酸性增强,促凝血速度加快,在p H5.0+Hyals时凝血时间最短,为12 min。体外细胞吞噬试验显示,纳米粒子对MCF-7和MDA-MB-231具有主动靶向性,可通过CD44和HA特异性作用介导吞噬,被癌细胞吞噬后在内涵体/溶酶体中被p H/Hyals快速分解,释放出DOX和Ca²⁺,表现出良好的癌细胞杀伤力,IC₅₀值分别为2.5μg/m L和9.9μg/m L,同时Ca²⁺从细胞内向细胞外迁移。