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本研究建立了一种食品和饲料中动物源性成分PCR-层析试纸条快速检测方法,首先提取动物源性成分DNA,然后针对物种特异性DNA序列,设计引物,并对引物进行标记,两条引物的5′端分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和生物素(biotin),最后利用层析试纸条对结果进行判读。通过将PCR与通用免疫金标层析试纸条结合,实现了对食品和饲料中动物源性成分的简便、快捷、低成本、可视化的检测。1.引物的特异性:以驴肉和鸽子肉为阳性样品,其他动物样品和植物样品为阴性样品,使用标记过的驴和鸽子引物对其进行扩增,使用本研究建立方法进行检测。结果表明,本研究所设计的引物具有很高的特异性,能对驴和鸽子成分样品进行有效扩增。2.绝对灵敏度:将驴和鸽子DNA 5倍倍比稀释,使其浓度分别为100ng/μL,20 ng/μL,4 ng/μL,0.8 ng/μL,0.16 ng/μL,0.032 ng/μL,0.0064 ng/μL,0.0013 ng/μL,0.0003 ng/μL,0.0001 ng/μL and 0.00002 ng/μL,使用本研究建立方法进行检测。结果表明,本方法绝对灵敏度达到0.0013 ng/μL。3.实际灵敏度:分别以驴肉、鸽子肉为阳性样品,以牛肉模拟掺假样品,将驴肉、鸽子肉与牛肉切片,60℃烘干,研磨成粉末,过18目筛筛取粉末,制备驴肉和牛肉、鸽子肉和牛肉的混合模拟样品,以驴肉(鸽子肉)肉粉的质量百分比(W/W)为100%,50%,25%,10%,5%,1%,0.1%,0.01%,0.001%比例混匀,提取基因组DNA,DNA浓度调至5 ng/μL,使用本研究建立方法进行检测。结果表明,最低检测限可达0.01%,证明了本方法对于混合样品检测的高灵敏度。4.加工处理样品的实际灵敏度:将驴肉和牛肉、鸽子肉和牛肉混合样品分别用100℃高温2 h,油煎5 min。结果表明,经高温和油煎两种方式加工处理后,最低检测限降低为0.1%(w/w)。5.稳定性:将未处理的0.01%驴肉和牛肉、鸽子肉和牛肉的混合样品及高温和油煎2种加工处理的0.1%驴肉和牛肉、鸽子肉和牛肉的混合样品,重复20次进行最低检测限稳定性检测。结果表明,20次试纸条检测检测线均变红,结果均为阳性,即最低检测限的稳定性良好,检出率为100%。