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肌纤维类型是影响猪肉品质的重要因素,但是通过传统的杂交育种方法来改变猪肌纤维的类型时间过长。然而转基因技术的出现,提供了一种快速改变动物遗传信息并获得新表型的方法,成为育种的新方法。本研究选择猪PGC-1α这一与肌纤维转化相关的基因用于制备表达PGC-1α的转基因小鼠,为转基因猪的制备提供理论依据。首先,利用NCBI查询猪PGC-1α基因的mRNA序列,在起始密码子前添加Sal Ⅰ酶切位点,在终止密码子后添加Not Ⅰ酶切位点,然后合成cDNA序列,并将其克隆进pCAGGS-neo真核表达载体,利用脂质体的方法转染小鼠的C2C12细胞,通过RT-PCR能够检测到PGC-1α在小鼠C2C12细胞中得到广泛表达。利用合成的PGC-1α全长cDNA序列构建了转基因载体pCAGGS-PGC-1α-neo,用于转基因小鼠的制备。通过显微注射的方法制备pCAGGS-PGC-1α-neo转基因小鼠,PCR检测证实22只pCAGGS-PGC-1α-neo转基因小鼠的基因组中整合有转入基因,转基因阳性率为29.73%,选取founder鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配传代,建立相应的转基因小鼠系。对转基因小鼠系中外源性PGC-1α表达进行鉴定,首先提取转基因小鼠肌肉组织的总RNA,进行了RT-PCR的检测,结果表明pCAGGS-PGC-1α-neo转基因小鼠的肌肉组织中有PGC-1α的转录。然后分别提取pCAGGS-PGC-1α-neo转基因小鼠和野生型小鼠的肌肉组织总蛋白,用PGC-1α的多克隆抗体做Western blot,结果在转基因小鼠的肌肉组织中检测到有更多PGC-1α的表达。通过肉眼对肌肉的生态学观察,转基因小鼠的大部分肌纤维呈现出氧化型肌纤维发红的特性,而同窝的非转基因小鼠的肌纤维在外观上是苍白的。用小鼠肌肉组织制作石蜡组织切片,对转基因小鼠和非转基因小鼠的肌纤维进行HE染色,通过观察肌纤维的形态,可以看出：转基因小鼠含有部分的Ⅰ型肌纤维,而在非转基因小鼠中几乎都是Ⅱ型肌纤维。这些结果表明PGC-1α的超表达能够促使小鼠肌肉的Ⅱ型肌纤维向Ⅰ型肌纤维转化。