【摘 要】
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蛇毒含有多种影响凝血系统的生物活性成分，其中大部分是酶和多肽。为了获得蛇毒类凝血酶，本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5’和3’保守性序列设计了引物；通过逆转录—聚合酶链式
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蛇毒含有多种影响凝血系统的生物活性成分，其中大部分是酶和多肽。为了获得蛇毒类凝血酶，本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5’和3’保守性序列设计了引物；通过逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增得到特异性蛇毒类凝血酶(TLE)基因，与原核表达载体pMAL-p2X连接构建融合表达载体，获得重组质粒pMAL-TLE。
重组质粒pMAL-TLE经测序、鉴定后，转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导，上Amylose树脂柱纯化，用FactorXa切割，得到分子量约30Kd的重组目的蛋白。
对表达蛋白和重组TLE蛋白进行免疫印迹检测分析，结果均为阳性。重组蛇毒类凝血酶能够被抗蝮蛇蛇毒血清抗体所识别，说明重组蛇毒类凝血酶具有一定的生物活性。同时本实验对载体的构建、蛋白的表达和纯化等各个步骤的条件进行了实验优化，得到了良好的结果。
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