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【研究背景】妊娠后,胚胎滋养层细胞和母体蜕膜基质细胞共同构成了母一胎界面,此时,作为固有免疫系统成员的自然杀伤细胞（Natural killer cells,NK）,大量富集于母胎界面的蜕膜组织中。研究报道称妊娠后居留在蜕膜中的NK细胞（dNK）表型和功能十分特殊,并在母胎免疫耐受及胚胎发育中起重要作用。其主要表型为CD56brightCD16-,细胞表面几乎全部表达CD49a。而存在于人外周血中的NK细胞（pNK）主要表型为CD56dimCD16+,其细胞表面几乎不表达CD49a。同时dNK细胞还具有独特的功能特性:与pNK细胞相比dNK细胞杀伤功能较弱,但有较强的细胞因子分泌能力。究竟是哪些关键因素维持着蜕膜NK细胞的特有表型和功能。目前知之甚少。CD49a作为黏附分子在炎症,固有免疫,细胞黏附,迁移,生长分化调节等生物学过程中发挥重要作用。我们课题组发现CD49a在正常dNK细胞和反复流产病人dNK细胞中存在差异性表达,流式细胞术检测发现CD49a在正常dNK细胞中的表达明显高于反复流产病人dNK细胞。CD49a是否参与调控dNK细胞的功能,这将是我们需要进一步探讨的问题。因此,本课题将探索CD49a在蜕膜NK细胞中差异性表达的意义,以及涉及的机制。长链非编码RNA,是一种转录本长度超过200个核苷酸的非编码RNA,可以在转录或转录后水平调控基因的表达并在免疫系统中发挥重要作用。然而lncRNA在NK细胞中的功能研究甚少。我们前期通过lncRNA芯片技术筛选到一个在蜕膜NK细胞中特异性高表达的lncRNA,生物信息学分析发现其潜在靶向CD49a。因此,我们将此lncRNA命名为lnc-49a。Lnc-49a是否可以调控蜕膜NK细胞中CD49a的表达?它是否又可以调控蜕膜NK细胞的功能?这也是我们接下来要探讨的问题。【研究方法】1.利用磁珠分选试剂盒获得纯化的NK细胞。2.FACS检测正常dNK细胞以及反复流产dNK细胞杀伤相关分子perforin和Granzyme-β,以及CD49a表达差异。3.利用中和抗体anti-CD49a阻断CD49a表达,用Transwell检测正常dNK迁移能力变化,黏附实验检测正常dNK细胞黏附能力变化4.qPCR检测CD49a阻断之后,perforin,Granzyme-β,IFN-γ表达情况。5.利用核转染干扰Lnc49a表达,FACS和qPCR检测CD49a以及杀伤相关分子perforin,IFN-γ的表达变化,以及51Cr释放实验检测NK细胞杀伤功能的变化。【研究结果】1.利用磁珠分选获得纯度90%以上的NK细胞。2.FACS检测发现反复流产病人dNK细胞的杀伤相关分子表达明显高于正常dNK细胞,而CD49a的表达明显低于正常dNK3.CD49a阻断之后对正常dNK细胞的迁移能力和黏附能力的影响:Transwell实验和黏附实验结果显示,在CD49a阻断之后,dNK细胞的迁移能力和黏附能力均明显下降。4.CD49a阻断之后对正常dNK细胞杀伤相关分子表达的影响:qPCR检测发现在mRNA水平,PRF1、GzmB、IFNG表达明显升高。5.核转染lnc-49a siRNA敲低正常dNK细胞中lnc-49a的表达之后,表面分子CD49a表达下降;FACS及qPCR检测发现dNK细胞杀伤相关分子perforin,IFN-r表达升高,51Cr释放实验也证明dNK细胞的杀伤功能提高。【结论】1.CD49a可以促进正常人蜕膜NK细胞的迁移和黏附能力,同时可以抑制NK细胞中perforin、Granzyme-B、IFN-r的表达。2.Lnc-49a正向调控正常人蜕膜NK细胞CD49a表达,同时可以抑perforin,IFN-r的表达而参与dNK细胞的功能调控。