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目的:1.观察心肌细胞中GPR75受体表达及20-HETE对GPR75受体激活作用;2.探究GPR75受体在20-HETE诱导的心肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:原代培养乳鼠心肌细胞和传代培养大鼠H9c2心肌细胞,慢病毒转染敲减GPR75基因表达,随机分组(n=6):Control组,20-HETE组(100nmol/L),sh Ctrl+20-HETE组(100nmol/L),sh GPR75+20-HETE组(100nmol/L),sh Ctrl组和sh GPR75组。加药组细胞药物孵育24h后,分别通过TUNEL法检测细胞凋亡率;DHE荧光探针检测心肌细胞内ROS的含量;q RT-PCR法检测GPR75受体以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的m RNA表达;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位;Western blot法检测GPR75、Bcl-2、Bax及细胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)蛋白表达;发色底物法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)活性;ELISA法检测心肌细胞内三磷酸肌醇(Inositol triphosphate,IP3)含量。结果:1.GPR75受体在心肌细胞中的表达分别在培养的乳鼠心肌细胞和大鼠H9c2心肌细胞中,应用q RT-PCR法、Western blot法检测GPR75受体的m RNA及蛋白水平表达。结果显示,GPR75受体在这两种心肌细胞中m RNA和蛋白水平均有表达;与Control组相比,转染了sh GPR75的H9c2细胞GPR75 m RNA及蛋白的表达分别降低了71.24%和64.95%(P<0.05);与H9c2心肌细胞一致,转染了sh GPR75的乳鼠心肌细胞,GPR75受体m RNA及蛋白表达与Control组相比,分别降低了70.98%和75.25%(P<0.05);而转染了sh Ctrl的心肌细胞中,GPR75受体的m RNA及蛋白表达与Control组无显著差异(P>0.05)。2.20-HETE对心肌细胞GPR75受体表达及IP3生成的影响与Control组相比,20-HETE处理组H9c2心肌细胞内GPR75蛋白表达升高1.53倍,IP3含量增加2.09倍(P<0.05)。与H9c2心肌细胞一致,20-HETE孵育后的乳鼠心肌细胞内GPR75蛋白表达升高1.51倍,IP3含量增加3.23倍(P<0.05),而敲减GPR75受体表达后显著阻断了20-HETE如上作用。3.敲减GPR75受体对20-HETE诱导的心肌细胞凋亡影响20-HETE处理后,H9c2心肌细胞凋亡率由对照组的2.29±0.88%显著增加至51.98±5.58%(P<0.05),而转染sh GPR75,敲减GPR75受体表达后,显著抑制了20-HETE诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05)。作为阳性对照,20-HETE处理转染了sh Ctrl的心肌细胞后细胞凋亡率亦显著增加(P<0.05)。单独sh Ctrl、sh GPR75组与Control组无显著差异(P>0.05)。4.敲减GPR75受体抑制20-HETE诱导ROS过量生成使用20-HETE处理后,H9c2心肌细胞内ROS水平比对照组显著增加了3.9倍(P<0.05),而敲减GPR75受体表达后显著抑制了20-HETE诱导的细胞内ROS过量生成作用(P<0.05)。20-HETE处理转染sh Ctrl的心肌细胞后,细胞内ROS水平比对照组显著亦增加3.7倍(P<0.05)。5.敲减GPR75受体阻断20-HETE诱发细胞线粒体膜电位(ΔYm)下降与Control组相比,20-HETE处理组H9c2心肌细胞ΔYm显著下降了78.83%(P<0.05),而敲减GPR75受体表达后显著抑制了20-HETE诱导的ΔYm下降(P<0.05)。此外,20-HETE处理转染了sh Ctrl的心肌细胞后ΔYm亦明显下降了80.98%(P<0.05)。6.敲减GPR75受体对20-HETE诱导的Bax和Bcl-2表达的影响20-HETE处理后,H9c2心肌细胞Bax的m RNA表达比Control组显著增加了1.91倍(P<0.05),Bcl-2的m RNA表达明显降低了63.52%(P<0.05);与m RNA水平表达的变化一致,20-HETE处理后H9c2心肌细胞Bax蛋白表达增加了1.60倍(P<0.05)同时Bcl-2蛋白表达下调了53.07%(P<0.05);而敲减GPR75受体表达后,显著抑制了20-HETE如上作用(P<0.05)。7.敲减GPR75受体抑制20-HETE诱导的细胞色素C(CytC)蛋白表达增高与Control组相比,20-HETE处理组H9c2心肌细胞Cyt C的蛋白表达显著升高1.83倍(P<0.05),而敲减GPR75受体表达后显著阻断了20-HETE引起的Cyt C蛋白表达升高(P<0.05)。作为阳性对照,20-HETE处理转染了sh Ctrl的心肌细胞后Cyt C蛋白表达亦明显升高(P<0.05)。8.敲减GPR75受体阻断20-HETE诱导的Caspase-3活性增强作用20-HETE处理后,H9c2心肌细胞Caspase-3活性比对照组显著增强2.68倍(P<0.05),而敲减GPR75受体表达后显著阻断了20-HETE这种作用(P<0.05)。此外,20-HETE处理转染了sh Ctrl的心肌细胞后Caspase-3活性亦明显增强2.67倍(P<0.05)。结论:1.GPR75受体在培养的乳鼠心肌细胞和大鼠H9c2心肌细胞中表达且20-HETE在对其具有激活作用;2.在大鼠H9c2心肌细胞中,GPR75受体参与了20-HETE诱导的细胞凋亡作用;3.20-HETE通过GPR75受体介导引起ROS生成、导致心肌线粒体过氧化损伤,从而激活线粒体依赖的内源性细胞凋亡途径。