基于模式生物线虫探讨红参抗衰老作用研究

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本文基于秀丽隐杆线虫模型,通过各项生理指标,观察红参水提物(RGWE)对线虫抗衰老的作用效果。其次,利用TMT蛋白定量组学技术以及qRT-PCR技术,比较线虫在给药(红参水提物)前后的蛋白表达,筛选差异蛋白,运用生物信息技术,进行红参抗衰老作用研究。
  1、比较人参不同炮制品对秀丽隐杆线虫寿命的影响
  通过煎煮法提取红参、生晒参、大力参、鲜人参的水提物,药物置于NGM培养基和OP50菌液中(药物浓度设置为1.4mg/mL和5.6mg/mL),观察各组线虫的寿命。研究结果显示,生晒参、鲜人参、红参5.6mg/mL组线虫的寿命均比空白组短,红参1.4mg/mL组以及大力参5.6mg/mL组的线虫寿命得到了显著的延长,其他组药物作用没有显著性差异。
  2、分析红参水提物对秀丽隐杆线虫生命指标的影响
  利用高效液相色谱法、苯酚-浓硫酸法和Bradford法测定RGWE中人参皂苷、多糖、蛋白质含量;将秀丽隐杆线虫分组培养在普通培养基以及添加了不同浓度RGWE(0.8mg/mL,1.4mg/mL,2mg/mL)的培养基中,观察RGWE对线虫寿命、热应激、氧化应激、ROS含量、脂褐素含量的影响。实验结果表明,RGWE能极显著延长秀丽隐杆线虫的寿命,提高其抗应激能力,降低脂褐素水平及ROS的含量。
  3、应用蛋白质组学技术,进行红参抗衰老作用研究
  利于TMT标记的蛋白质定量技术和质谱分析技术,鉴定分析了给药组线虫和空白组线虫在蛋白表达上的差异,筛选得到45个差异蛋白,其中5个上调,40个下调,无定量信息的上调蛋白质1个,下调蛋白质9个。对鉴定出差异蛋白进行生物信息学KEGG通路和GO功能分析,发现了一些红参延长线虫寿命的潜在作用靶点。比如:YES相关蛋白(YAP-1)、卵黄蛋白原(VIT1-6)等。除此之外,通过qRT-PCR测定有关衰老相关基因的表达水平以及突变体线虫的荧光观察,发现RGWE能显著上调daf-16、sir2.1基因的表达水平,促进daf-16由细胞质转入细胞核,激活下游sod-3的表达。
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