检测西瓜噬酸菌和稻黄单胞菌的环介导等温扩增技术及荧光定量PCR方法的建立

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:alanlee75
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzae,Xoo)均为我国重要的检疫性种传细菌病害。目前,西瓜噬酸菌已对我国的瓜类生产及相关产业构成了极大的威胁,而稻黄单胞菌也对粮食生产带来了不利的影响。鉴于此,建立简便、快捷、高效的检测技术是防治这三种病害传播扩散的有效措施。  本实验采用了Taqman荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)两种检测方法,针对这三种病原物分别设计了特异的探针和引物,并对其纯培养物和实地样品进行了特异性、灵敏度、实地样品等方面的检测,同时对比评价了这两种检测手段。结果表明:在A.citrulli的检测中,LAMP技术和荧光定量PCR方法均可有效的区分开Acidovoraxavenae(燕麦褐条病菌)、Acidovoraxfacilis(敏捷噬酸菌)、Acidovoraxkonjaci(魔芋噬酸菌)及Acidovoraxcattleyae(卡特莱兰褐斑病菌)等亲缘近种,且检测到的种子带菌率为0.1%(1/1000),另外,可从13种新疆市售种子中检出6份种子携带A.citrulli。在水稻细菌性条斑病菌和白叶枯病菌的检测中,探针Xooc-Probe及Xoo-Probe均有效的区分开了白叶枯病菌和条斑病菌,LAMP技术同样实现了特异性扩增,对健康水稻种子和发病区的种子进行检测,条斑病菌的两种检测方法均可从2份市售种子中检出2份种子携带条斑病菌,从2份自然发病种子中检出1份种子带菌,从7份发病区接种白叶枯病菌获得的种子中检测到0份种子带菌。白叶枯病菌的两种检测手段可从2份市售种子检出0份种子携带白叶枯病菌,从2份自然发病种子中检出1份种子带菌,从7份发病区接种白叶枯病菌获得的种子中检测到4份种子带菌。对于Taqman荧光定量来说,三种病原菌最终检测限度均为2.0×101cps/μL,而LAMP的检测最低限均为2.0×102cps/μL,显然荧光定量的检测灵敏度比LAMP高10拷贝数。另外在本实验中,荧光定量的检测时长为2h,环介导等温扩增技术的检测时长为40min~60min,在特异性相同、实地样品检测结果一致的情况下,综合考虑检测周期、检测成本和应用性等特点,环介导等温扩增技术更适合植物病原物的检测,亦更适于基层检疫机构的推广应用。
其他文献
送走猴年,迎来鸡年。在钱币收藏市场,近期最热门的藏品非鸡年生肖纪念币莫属。因为“鸡”与“吉”同音,寓意大吉大利,所以许多收藏爱好者都纷纷预约,为新年图个好彩头。  2017年双色铜合金鸡年纪念币面额为10元,全国发行量5亿枚。其中,湖南省调拨数量为1700万枚,由中国银行承办发行。  笔者看到,鸡年纪念币图案设计相当精美,栩栩如生。正面图案中央是一只雄赳赳、气昂昂的公鸡正在报晓,预示着春天来到。周
随着日新月异的科学技术进步,教育领域也在发生着翻天覆地的变化,翻转课堂教学模式的出现加快了教育信息化的步伐.高中通用技术课作为一门基础理论与实践技能并重的课程,如何
随着教育改革的不断推行,国家开始重视高中教育,提高了对高中教育的要求.高中生物科目是高中教育的重要组成部分,也是高考的考试科目之一,具有重要的教育意义.但是由于高中生
合作学习成为了很多教师关注的重点,这也是重要的教学形式,带领学生朝着良好的方向运行.教师激活学生学习欲望,让学生感受到合作学习的价值和意义.教师通过小组合作学习的形
随着我国教育体制的不断改革与创新,学校开始逐渐重视小学数学教学的效果.小学数学教学是教学体系中最为核心的内容,在学生学习和成长的过程中起着极为关键的作用.传统的小学
思想政治教学是初中教育教学的主要工作之一,也是引导初中生树立正确人生观、世界观和价值观的重要基础.在初中思想政治教学中,将课堂教学生活化,采用适宜的方法和内容进行教
就初中学习物理而言,初中阶段是物理知识学习的重要阶段,能够奠定未来阶段学习物理的重要基础,从本人的以往的教育经验可知,学生在初中物理学习过程中经常会遇到障碍与问题,
在平时的教学中,教师要在传授基础知识的同时,有意识地、恰当在讲解与渗透基本数学思想和方法,帮助学生掌握科学的方法,从而达到传授知识,培养能力的目的,只有这样.学生才能
语文学科可谓是所有学科的基础,学好语文知识有助于学生理解其它课程的知识.小学阶段的语文阅读是语文教学中的重要环节,学生通过阅读可以获得知识,并在阅读的过程中理解知识
作文中的宕笔手法,是撰文的一种常用艺术手法,所谓宕笔,就是艺术在创作时有意布置迷阵的“奥妙”,从而使艺术形象愈发生动.使文章有妙趣横生之韵味.大家熟悉的文学大家欧阳修