论文部分内容阅读
在世界范围内,宫颈癌位居女性恶性肿瘤的第四位,并呈现年轻化趋势。85%宫颈癌发生于发展中国家,并且居癌症死因的首位。目前国内外对宫颈癌的治疗仍采用以手术为主联合放化疗的综合治疗模式,虽然比较成熟,但对患者的生育能力及正常组织生理功能均造成不同程度的影响,对于要求保留生育功能的患者需要一种能够保留宫颈生理结构和功能的治疗方法,对于IIb期以上及无法手术切除的宫颈癌患者及放化疗后复发的患者也需更有效的局部治疗方法。各种消融技术以其创伤小、恢复快的优势,日益受到医生和患者的关注。但是目前的消融技术均属于热消融技术,产生凝固性坏死使肿瘤细胞死亡,因此存在一些固有的缺点,主要表现为对正常组织的损伤。不可逆电穿孔(irreversible electroporation IRE)是一种新型软组织消融技术,原理是利用超短的高压直流电,在消融组织细胞的细胞膜上产生多个纳米级微孔,不可逆地破坏了细胞内外平衡,诱导细胞凋亡并最终死亡。由于神经、血管等结构除细胞成分外,还含有较多胶原纤维等细胞外基质成分,因此在消融过程中损伤甚微,正常组织得以迅速恢复。这一优势使得IRE消融技术逐渐应用于临床,目前国内外报道的使用IRE消融的恶性肿瘤主要有肝癌、胰腺癌、前列腺癌等。本研究中通过消融兔正常宫颈组织及消融兔宫颈移植瘤术后的观察,弥补IRE对宫颈组织相关的研究领域的空白。目的:研究不可逆电穿孔技术消融兔宫颈组织的安全性及消融宫颈移植瘤的有效性,为局部晚期或放化疗后复发及要求保留生育功能的早期宫颈癌治疗开辟一条新的途径。方法:第一部分:IRE消融宫颈组织的安全性实验。研究对象为正常兔宫颈组织,50只新西兰兔,随机分为9组(对照组2只,其余8组每组6只)。通过消融后设置的时间点(0小时,12小时,1天,2天,4天,7天,14天,28天)评估对宫颈组织的影响。评估方法:大体病理学,透射电镜,苏木精-伊红(H&E)、马松三色(Masson)染色和脱氧核苷酸转移酶缺口末端标记(TUNEL),探讨不可逆电穿孔对宫颈组织的影响及术后组织恢复能力。第二部分:建立兔VX2宫颈原位移植瘤模型。24只新西兰白兔,其中2只用于后腿种瘤制成荷瘤种兔,取后腿新鲜肿瘤组织制备成组织块,用于种植其余22只兔宫颈组织。随机分为A、B两组,每组11只,A组在宫颈部位荷包缝合包埋2块体积约为1mm~3的VX2新鲜肿瘤组织块,B组则包埋1块。比较两组的肿瘤生长、转移情况以及生存时间。第三部分:IRE消融兔VX2宫颈原位移植瘤的有效性实验。首先按第二部分实验方法建立20只新西兰兔VX2宫颈移植瘤模型。当监测宫颈移植瘤的直径达到1.5~2厘米时,对其中随机15只进行IRE消融。对照组(n=5)没有接受消融。采用超声,计算机体层摄影术(CT)监测肿瘤生长,标本行H&E染色,TUNEL,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色法评估消融的疗效。结果:第一部分:所有实验动物均成功接受了IRE消融,无心律失常、感染、死亡等严重并发症发生。透射电镜下观察到细胞膜破裂和细胞基质泄露,TUNEL证实了导致消融宫颈细胞死亡的机制是细胞凋亡。因宫颈组织内含有较多胶原纤维成分,维持了宫颈的结构,使得宫颈组织可以快速恢复。从7天开始观察,就有胶原再生的迹象,纤维增生,肌纤维的再生和上皮延伸。在消融后28天,消融宫颈组织已恢复接近正常。第二部分:成瘤率100%,肿瘤3周前呈椭圆形,质硬,表面附有丰富血管,剖面灰白色,鱼肉状,病理染色符合鳞状细胞癌生长生物学性状,4周后出现中心坏死,形态不规则。1w时,A、B组的肿瘤平均直径分别为(6±1.33)mm和(4.2±0.79)mm;2w时,A、B组肿瘤平均直径分别为(10±1.83)mm和(8.2±1.55)mm;3w时,A、B组的肿瘤平均直径分别为(21.4±3.03)mm和(19.5±2.68)mm;4w时,A、B组肿瘤平均直径分别为(39±2.45)mm和(33.4±3.34)mm;5w时,A、B组肿瘤平均直径分别为(45±4.06)mm和(37.9±3.07)mm。A、B组的平均生存期分别为(47.5±4.6)d和(53±5.2)d。B超检查:A组在2w时发现1例腹壁肿瘤(考虑为种植瘤),CT检查:A组在4w时发现1例腋窝淋巴结转移,A组在5w时发现2例肝脏转移结节,B组发现1例。第三部分:肿瘤体积在治疗后得到控制,逐渐减小。TUNEL结果表明IRE消融能够诱导细胞凋亡途径导致肿瘤细胞死亡,PCNA结果表明肿瘤增殖能力被有效抑制。但因电参数原因在本研究中未诱导肿瘤边缘细胞完全消融。对照组肿瘤生长迅速。生化指标证实IRE消融术后没有对全身重要脏器产生副作用。结论:1、IRE技术消融宫颈组织是安全可行的,消融没有引起严重的宫颈损伤,组织基本架构存在,胶原纤维再生迅速,宫颈组织可逐渐得到恢复。2、采用兔VX2肿瘤组织块可成功建立宫颈移植瘤动物模型,具有成瘤率高,生长迅速等特点,可用于宫颈肿瘤局部治疗研究。3、IRE消融可以有效消融兔VX2宫颈移植瘤,然而最佳消融参数有待进一步探讨。IRE消融可作为宫颈肿瘤局部治疗的一种新方法。