鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是一种对雏鸭高度致死,且传播迅速、以肝炎为主要病变特征的病毒性传染病,主要病原为小RNA病毒科、禽肝病毒属的鸭甲肝病毒(Duck Hepatitis A Virus,DHAV)。DHAV包括DHAV-1、DHAV-2(台湾新型)和DHAV-3(韩国新型)三种血清型,但它们缺乏交叉免疫保护。本试验在建立多重RT-PCR及荧光定量RT-PCR检测DHAV的基础上,研究了雏鸭体内特异性抗体水平高低对人工感染病毒复制的影响及病毒感染雏鸭后不同时期特异性抗体的治疗作用,为生产中特异性抗体用于预防和治疗鸭病毒性肝炎(DHAV感染)提供指导。本研究的主要结果如下:1.多重RT-RCR检测DHAV-1和DHAV-3根据Genbank中登录的DHAV全基因序列设计合成4条特异性引物,建立检测感染鸭肝组织中DHAV的多重RT-PCR方法。该方法敏感,对cDNA最小检测量为10ng;特异性强,对鸭疫里默氏菌、大肠杆菌感染及健康鸭肝组织的检测为阴性,各基因型毒株间无交叉反应;对人工感染鸭肝组织及自然感染病料的的检测结果与实际感染情况的符合率为100%。2.荧光定量RT-PCR检测DHAV方法的建立根据Genebank上发表的DHAV-1/3全基因序列合成引物,分别建立检测DHAV-1和DHAV-3的荧光定量RT-PCR方法。建立的方法检测DHAV-1时,扩增相关系数为0.998,熔解曲线为单一特异峰,熔解温度为82.5℃,最小检出量为41 copies/μL;检测DHAV-3的扩增相关系数为0.999,熔解曲线为单一特异峰,熔解温度为82.5℃,最小检出量为66 copies/μL。该方法对人工感染鸭肝组织的检测率为100%,18份自然感染病料的检测结果为DHAV-1、DHAV-3及二者混合感染分别为8份、6份和4份。3.不同抗体水平雏鸭人工接种DHAV后病毒的复制规律1日龄雏鸭经颈部皮下注射0.5mL效价大于1:105(鸭胚中和效价)的鸡抗DHAV-1卵黄抗体,24h后经腿部肌肉接种103 LD50(对1日龄雏鸭半数致死量)病毒,在感染后75h内试验鸭获得100%保护、荧光定量RT-PCR检测肝组织病毒为阴性、肝组织病理学变化不明显、鸭血清中ALT水平无显著变化。卵黄抗体效价为1:52、1:26和1:17的存活率分别为80%、60%和10%。随抗体效价的下降,试验鸭肝组织中病毒载量逐渐增加、病理组织损伤越来越严重、血清中ALT水平逐渐上升。以上结果显示,鸭胚中和效价大于1:105的鸡抗DHAV-1卵黄抗体0.5mL可使1日龄雏鸭获得完全攻毒保护。4.雏鸭感染DHAV不同阶段的抗体疗效评价1日雏鸭腿部肌肉接种103 LD50 DHAV-1建立感染模型,在感染的不同阶段用鸡抗DHAV-1卵黄抗体0.5mL(鸭胚中和效价为1:524)经颈部皮下注射进行治疗。在5h、10h、15h、20h和25h治疗的存活率分别为100%、90%、70%、30%、20%。随着抗体治疗时间的延后,试验鸭肝组织中的病毒载量逐渐增加、病理组织损伤越来越严重、血清中ALT水平逐渐上升。以上结果显示,在DHAV-1感染后的5h内注射,1日龄雏鸭可以获得完全保护。