金纳米棒和金纳米十字的制备及其在食品检测中的应用

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本论文基于金纳米棒的纵向等离子共振吸收峰随长径比可调、对周围介电环境敏感以及金纳米十字强的局域电磁场增强效应,结合紫外和荧光检测技术,建立了针对食品中微囊藻毒素-LR、培氟沙星、大肠杆菌致病基因的同步、快速、超灵敏检测新方法。1、确定了5-溴水杨酸与CTAB最佳使用浓度比1:20,硝酸银加入体积1.8mL,金种加入体积800μL和抗坏血酸加入体积350μL的金纳米棒生长体系。在此基础上调节生长溶液pH,制备出不同长径比的金纳米棒,结合紫外、透射电镜、电子衍射能谱以及X衍射推测了金纳米棒的生长过程;由于5-溴水杨酸的引入,将CTAB的使用浓度降低至0.05mol·L-1,降低CTAB生物毒性的同时,简化了后续的清洗步骤。2、基于两种长径比的金纳米棒,在磁小体信号放大作用下,构建了食品中微囊藻毒素-LR和培氟沙星的同步紫外检测方法。该方法对微囊藻毒素-LR和培氟沙星的检测范围在1ng·mL-1-20ng·mL-1之间,线性方程分别为Y=2.28X+1.15(R2=0.9950),Y=1.67X+0.99(R2=0.9968),最低检出限为0.33ng·mL-1,且特异性良好。其中微囊藻毒素-LR的样品加标回收率在98.51%-101.64%之间,培氟沙星的加标回收率在96.07%-104.22%之间。3、基于晶种生长法制备了具有四个枝状结构的金纳米十字,与多步合成法相比,只需一步生长即可,制备方法简单。研究了固相体系中金纳米十字和不同长径比金纳米棒对其附近cy5荧光分子的表面增强荧光效应,荧光测试结果表明金纳米十字的荧光增强效果最好,增强因子高达34倍。根据间接竞争ELISA的原理,以金纳米十字作为荧光增强材料,构建了一种高灵敏的表面增强荧光检测方法。该方法对微囊藻毒素-LR的检测范围在0.02ng·mL-1-16ng·mL-1之间,线性方程为Y=-483.38X+713.79(R2=0.9981),最低检测限为0.007ng·mL-1,且特异性良好。样品加标回收率在98.0%-102.2%之间。4、根据金纳米十字对cy5荧光分子依赖于距离变化的荧光猝灭和增强效应,参照大肠杆菌O157:H7eae A基因的一段保守序列,设计了两种目标基因识别探针,通过改变DNA碱基数目和cy5荧光分子的标记位置,分别构建了基于金纳米十字荧光猝灭效应和表面增强荧光效应的荧光检测方法。其中,基于荧光猝灭效应的turn-on型荧光法对目标DNA的检测范围在1×10-10mol·L-1-1×10-15mol·L-1之间,线性回归方程为Y=0.44X+7.35(R2=0.9983),最低检测限为0.3×10-15mol·L-1;而表面增强荧光法则在1×10-11mol·L-1-1×10-16mol·L-1之间,线性回归方程为Y=197.32X+3311(R2=0.9904),最低检测限为0.3×10-16mol·L-1。两种方法对单碱基错配DNA序列、完全不互补DNA序列和完全互补目标DNA序列均具有较好的特异性识别能力。
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