红毛藻多糖的分离纯化及其降血糖和降血脂的活性研究

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红毛藻是我国东南沿海特有的经济红藻资源,其中含有大量多糖类物质,本论文以此为研究基础,从红毛藻中通过水提醇沉方法制备得到红毛藻粗多糖,并进行纯化得到纯化多糖组分,进而通过相关酶动力学和构建细胞模型等方法,对红毛藻多糖的体外降血糖、降血脂的活性及其潜在的活性机理进行研究。主要结果如下:(1)经过热水抽提、乙醇沉淀后获得红毛藻粗多糖,并采用葡聚糖凝胶Sephadex G75柱层析和阴离子交换DEAE Cellulose-52柱层析法,对粗多糖进行纯化和各多糖组分的分离。经过凝胶柱层析纯化得到红毛藻多糖片段F,将其进一步用离子交换柱层析分离纯化得到片段SF1、SF2和SF3。(2)利用高效液相色谱、离子色谱和红外光谱等现代仪器分析技术,对红毛藻多糖片段F、SF1、SF2和SF3的理化特征进行分析。结果表明纯化红毛藻多糖F主要由阿拉伯糖、半乳糖和糖醛酸组成,多糖组分片段SF1主要由阿拉伯糖和葡萄糖组成,片段SF2主要由半乳糖和阿拉伯糖组成,片段SF3主要由半乳糖与葡萄糖组成,四个片段硫酸基团和糖醛酸的含量均较低。其分子量分别为43.16 kDa、2.07 kDa、32.07 kDa、28.32 kDa。红外光谱分析结果表明,纯化多糖F中存在吡喃糖的结构和α-糖苷键,并且推测还有O-乙酰基的存在,SF1片段中观察到α-构型异头碳的存在,SF2片段则符合吡喃糖环存在的特征吸收峰,而在SF2和SF3片段中均含有羧基基团。(3)通过相关酶学方法分别分析纯化红毛藻多糖F对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的影响,结果表明红毛藻多糖片段对两种血糖调节关键酶均有显著的抑制作用,其IC50值分别为1.26 mg/m L和1.34 mg/m L。通过酶动力学法得到多糖F对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的Lineweaver-Burk双倒数曲线,分析结果表明F对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的酶活的抑制作用均为可逆抑制,但在抑制类型上存在明显差异,多糖F对α-淀粉酶的抑制类型属于可逆竞争性抑制,对α-葡萄糖苷酶的抑制属于可逆非竞争性抑制。(4)利用相关酶学方法分析红毛藻多糖片段SF1、SF2和SF3对于胰脂肪酶的影响,结果表明三个片段对胰脂肪酶均有显著的抑制作用,其IC50值分别为0.69,0.60和0.50mg/m L,SF3片段活性显著强于SF1和SF2两个片段,Lineweaver-Burk双倒数曲线分析结果表明SF3对胰脂肪酶抑制作用属于可逆竞争性抑制。构建高血脂HepG2细胞模型分析红毛藻多糖对细胞合成甘油三酯的影响,结果表明片段SF1、SF2和SF3对高血脂细胞模型中的甘油三酯合成均有显著的抑制作用,并且片段SF3的抑制作用显著强于片段SF1和SF2;构建高胆固醇HepG2细胞模型分析红毛藻多糖对细胞胆固醇、游离脂肪酸和甘油三酯合成的影响,结果表明多糖片段SF3对高胆固醇细胞中的胆固醇、游离脂肪酸和甘油三酯的合成均有抑制作用;利用Caco-2细胞构建脂肪酸吸收模型,发现SF1、SF2和SF3对Caco-2细胞吸收游离脂肪酸均有显著抑制作用,并且多糖片段SF1抑制作用显著强于SF2和SF3。综上结果表明红毛藻多糖有潜在的降血脂功效。本论文对红毛藻多糖的组成和基本结构特征进行了分析,并且阐明了红毛藻多糖具有潜在的降血糖和降血脂的活性并初步阐明了其活性机制,为进一步探究红毛藻多糖结构与生物活性的关系奠定理论基础。
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