Q烟粉虱气味结合蛋白(OBPs)与番茄褪绿病毒(ToCV)的互作研究

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番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)在我国以Q烟粉虱(Bemisia tabaci)为主要传播介体,通过半持久非循环的方式传播,分布范围广泛,对蔬菜作物和园艺观赏植物造成了严重的危害和经济损失。监测ToCV的发生与扩散对及时发现ToCV并采取相应预防措施有重要意义。气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)作为运输气味分子的载体,在昆虫与寄主植物的交流过程中,对嗅觉信号分子——植物挥发性化合物的识别具有至关重要的作用。研究OBPs在烟粉虱选择健康/感病植株的过程中的作用,能够为烟粉虱及其传播的ToCV的综合防治提供理论依据。本研究采用RT-PCR对湖南省蔬菜研究所基地的茄科蔬菜的ToCV和烟粉虱发生情况进行监测和检验,研究了烟粉虱OBPs与ToCV的互作机制。主要结果如下:1、对湖南省蔬菜研究所基地采集的疑似感染ToCV的番茄、茄子、辣椒和马铃薯四种茄科蔬菜各20份样品通过RT-PCR进行ToCV检测。RT-PCR扩增产物经纯化回收测序比对后,结果显示样品与北京番茄ToCV分离物(KC887999.1)部分序列相似度较高,达到99.0%。其中番茄、茄子、辣椒和马铃薯样品的ToCV感染率分别为100%、80%、85%和70%。对这四种病症蔬菜叶背面的烟粉虱进行ToCV RT-PCR检测,并鉴定其生物型。结果显示烟粉虱携带有ToCV,带毒率不低于87.5%,且生物类型鉴定为Q烟粉虱。2、采用RT-qPCR检测Q烟粉虱取食感染ToCV的番茄植株不同时间(24 h,48 h,72 h和96 h)后体内相关OBPs基因的相对表达水平,以Q烟粉虱取食健康的番茄植株作为对照。结果显示OBP3基因的相对表达水平与烟粉虱在获毒过程中其体内病毒量的变化趋势一致,即随着取食时间的增加,呈现先上升后下降的趋势,在48 h时达到最大。3、对Q烟粉虱RNA干扰(RNA interference,RNAi)的条件进行优化。结果显示采用人工饲喂的方法进行RNAi时,饲喂2天后烟粉虱的存活率较高。4、采用RNAi技术特异性沉默Q烟粉虱体内OBP3的表达,通过RT-qPCR分析RNAi效率与其他相关OBPs的相对表达水平。结果显示,通过RNAi 2 d后OBP3的表达降低至27.1%,RNAi效果较好;OBP3的表达被沉默后,Q烟粉虱体内部分OBPs的表达水平发生变化,其中OBP1和OBP2的相对表达水平显著上调,OBP5和OBP6显著下调,OBP4和OBP7没有明显变化。同时,OBP3的表达被干扰后,Q烟粉虱对健康/感染ToCV的植株的选择性也发生了变化:不携带ToCV的Q烟粉虱趋向于取食选择健康的植株,而携带ToCV的Q烟粉虱对健康/感染ToCV的植株没有明显的取食趋向性。
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