拟南芥功能未知基因AtLCR23初步研究

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目前有限的研究表明拟南芥LCR家族中部分蛋白主要具有植物防御功能,而该家族中绝大部分基因的功能是未知的。本研究通过生物信息学,分子生物学,细胞生物学的方法对LCR家族中功能未知基因AtLCR23进行了初步的研究,获得如下成果:1、通过生物信息学分析显示:AtLCR23基因位于拟南芥4号染色体上,基因全长为373bp,包含2个外显子和1个内含子,编码了77个氨基酸,从19至77位氨基酸构成了SLR1-BP结构域。2、通过筛选T-DNA插入突变体,获得lcr23纯合子,并利用RT-PCR鉴定lcr23突变体中Atlcr23基因没有表达,确定lcr23为功能缺失突变体。3、构建了pBI101-pAtLCR23-AtLCR23-GUS融合表达载体,转化野生型拟南芥Col。对转基因植株进行GUS组织化学染色处理,分析AtLCR23基因的组织表达模式,结果显示AtLCR23基因主要在拟南芥雌蕊的柱头表达。4、通过制作石蜡切片观察比较野生型Ws与突变体lcr23花器官,发现无明显差异。统计果荚及发育种子和败育种子等相关数据,发现突变体lcr23果荚中败育缺失种子稍微多于Ws。5、通过RT-qPCR检测SI自交不亲和相关功能基因SLR1、ARC1、PIP5K5的表达水平,发现lcr23突变体中SLR1基因表达明显下调,而ARC1、PIP5K5的表达量无明显变化。6、构建了过表达载体pCAMBIA1300-35S-AtLCR23和RNA干扰载体pGSA1285-AtLCR23转化野生型拟南芥Col,获得AtlLCR23过表达纯合子株系35S-23-6和358-23-8以及T2代RNAi干扰转化子。构建了AtLCR23基因GFP融合表达载体pCAMBIA1302-AtLCR23,以及与AtLCR23同源性较高的AtLCR21、AtLCR22、AtLCR15基因GUS融合表达载体,可用于后续研究。
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