研究目的利用鸡胚翅芽模型研究异叶败酱提取物对胚胎发育过程中基因Myf5, MyoD和PCNA表达模式的调控作用：同时,以人慢性髓细胞白血病K562细胞为模式细胞,运用蛋白质组学方法,研究异叶败酱提取物对K562细胞蛋白质表达谱的影响,鉴定差异蛋白,初步探讨其抗白血病机制。研究方法1.选择发育至HH16-20期鸡胚,随机分为实验组和对照组,分别将异叶败酱提取物含药念珠和PBS念珠植入鸡胚翅芽中,继续孵化24 h,处死,多聚甲醛固定过夜,进行原位杂交,组织切片,观察异叶败酱提取物对Myf5, MyoD和PCNA表达的影响。2.体外培养人慢性髓细胞白血病K562细胞,设立实验组和对照组,实验组以100μg/mL异叶败酱提取物干预,分别培养48 h。丙酮沉淀法提取细胞总蛋白,固相pH梯度双向凝胶电泳分离,考马斯亮蓝染色,建立双向凝胶电泳图谱。通过Image scanner及Lab Scan扫描软件获取双向凝胶电泳图谱,用PDQuest 7.4图像分析软件选择对照组凝胶图谱作为标准参考图像,对实验组凝胶图谱进行图像分析,筛选差异表达蛋白质。选取差异明显的蛋白质点进行MALDI-TOF-MS质谱仪分析,获得肽质量指纹图,Mascot软件搜索NCBI数据库鉴定蛋白质。研究结果1.异叶败酱提取物能够改变对鸡胚翅芽发育具有重要功能的基因表达水平,Myf5, MyoD和PCNA基因的表达被下调。2.本实验得到了分辨率、重复性都很好的异叶败酱提取物干预前后的K562细胞总蛋白双向凝胶电泳图谱,对照组和处理组3块凝胶的平均蛋白质点数分别为378±16和397±21。经过背景消减后,将其中的一块胶定为参考胶进行3块胶间的蛋白质点匹配,实验组和对照组平均匹配的点数分别为328±15和352±12,匹配率分别为86.77%和88.66%。3.获取差异表达蛋白质点24个,其中实验组表达上调的12个,表达下调的9个,仅在对照组中表达的3个。选取其中差异较为明显的13个蛋白点进行质谱鉴定,成功鉴定蛋白质点11个,其中2个蛋白点重复,包括真核翻译起始因子、膜突蛋白、α-微管蛋白、热休克蛋白90-β、热休克蛋白90-α、aging-associated gene 9 protein、血红蛋白亚单位ζ、血红蛋白亚单位γ-2、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、醛缩酶A、黄素还原酶。研究结论1.发育的鸡胚翅芽能够作为一个便利的、供体内研究中药提取物对基因表达作用的模型。异叶败酱提取物能使Myf5, MyoD和PCNA基因的表达被下调,抑制细胞分化和增殖。2.异叶败酱提取物抗白血病的机制可能是通过改变人慢性髓细胞白血病K562细胞蛋白质表达谱,通过上调和(或)下调真核翻译起始因子、膜突蛋白、α-微管蛋白、热休克蛋白90-β、热休克蛋白90-α、aging-associated gene 9 protein、血红蛋白亚单位ζ、血红蛋白亚单位γ-2、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、醛缩酶A、黄素还原酶等蛋白表达水平的改变影响K562细胞内骨架形成、凋亡诱导、细胞分化、能量代谢、增殖生长等生理过程。此类蛋白可能是异叶败酱提取物发挥抗肿瘤作用的关键作用靶点,为进一步研究异叶败酱提取物在蛋白质分子水平的抗肿瘤机制提供了新的证据。