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乳腺癌是世界范围内严重威胁女性健康,最常见并且致死率很高的肿瘤。尽管乳腺癌的治疗疗效不断提高,但仍有相当一部分患者复发或对常规治疗耐药。进一步筛选和发现乳腺癌治疗的新靶标,可能为乳腺癌的诊治提供新的思路。我们对乳腺癌细胞系基因表达谱芯片结果进行分析后,筛选出与乳腺癌生长相关的一个E3泛素连接酶DTL (denticleless E3 ubiquitin protein ligase),并对其在乳腺癌细胞中的表达和功能进行了初步研究。为了探究DTL在乳腺癌细胞中可能发挥的调控作用,我们首先通过荧光定量PCR (Q-PCR)和Western Blot的方法确定了DTL在几种乳腺癌细胞系中的表达情况,发现其在乳腺癌细胞中的表达较正常细胞高。用免疫荧光与激光共聚焦显微镜观察了DTL细胞亚定位情况,DTL定位于细胞质和细胞核。然后我们利用RNA干扰技术在MCF-7, MDA-MB-231中下调DTL的表达,通过MTT比色法和Brdu标记法检测细胞增殖情况,发现干扰DTL可以明显抑制乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231的增殖。因此我们推测DTL可能是通过影响细胞周期来发挥其调控作用的。接着我们在MCF-7, MDA-MB-231这两种细胞中转染siRNA-DTL后利用流式细胞术观察细胞周期的变化,发现干扰DTL后使得乳腺癌细胞周期G1期比例减少,G2/M期细胞比例增多。接着,我们通过RT-qPCR检测了几种常见的细胞周期蛋白、蛋白激酶以及蛋白激酶抑制因子的表达情况,发现在MCF-7中干扰DTL后可显著促进细胞周期蛋白激酶抑制因子P21 mRNA的表达, Western Blot提示干扰DTL后P21的蛋白水平也增加。说明DTL对细胞周期的作用可能通过调节P21的表达来发挥作用,但具体如何发挥作用,是否通过泛素相关的途径还是其他机制还有待于进一步研究。但在MDA-MB-231中siRNA-DTL后P21的mRNA和蛋白质水平没有变化,可能在不同的细胞中DTL的作用机制不同,有待于后续进一步验证。综上,在本研究中,我们发现DTL在各种乳腺癌细胞中高表达,干扰DTL可以抑制乳腺癌细胞增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期。DTL可能通过抑制P21的表达,促进MCF-7细胞的增殖,有可能作为乳腺癌的潜在治疗靶点。