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目的：探讨Scleraxis慢病毒载体介导hAMSCs后体外向人韧带成纤维细胞分化的潜能与效果。 方法：1）取人羊膜经胰酶和胶原酶消化分离hAMSCs，反复贴壁纯化后进行表型鉴定；透射电镜观察细胞内部结构；CCK-8 法检测 hAMSCs 增殖活性；定向分化 21d后，分别使用不同染色方法检测 hAMSCs 向骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞的分化效果。 2）取人交叉韧带残端经酶消化法分离培养hLFs，使用倒置相差显微镜观察细胞形态；CCK-8法检测细胞增殖能力，并与hAMSCs相比较；实时荧光定量PCR检测并比较两种细胞I型胶原、腱调蛋白(Tenomodulin)，Mohawk及Scleraxis相对表达量。 3）构建人Scleraxis基因质粒，经293T细胞对病毒进行收集、滴度测定及MOI测定后转染hAMSCs，RT-PCR和Westen Blot对Scx在hAMSCs中表达验证后，筛选持续分泌Scx的hAMSCs，测定韧带相关基因和蛋白的表达程度，并与Matrigel水凝胶混合后移植裸鼠皮下观察分化效果。 结果：1）酶消化法获得大量可稳定增殖的hAMSCs，成长梭形、漩涡状生长贴长；透射电镜显示 hAMSCs 呈椭圆形，结构清晰，细胞表面有少量微绒毛，染色质分布均匀，胞浆内可见丰富的内质网及排列规则的线粒体；流式表型鉴定示hAMSCs符合MSCs表型。成骨定向诱导后出现多个钙化结节；甲苯胺蓝染色呈示细胞合成多量糖胺聚糖；油红O染色显示胞浆内出现淡黄色脂滴。倒置相差显微镜观察显示， hLFs原代时多以长梭形贴壁生长，细胞核圆形，原代细胞数量较少；传代后呈长梭状并可见漩涡样集落；CCK-8 显示 hlFs 呈“S”形生长曲线，但增殖能力明显低于hAMSCs（P<0.05）；PCR结果显示，hLFs表达I型胶原、腱调蛋白(Tenomodulin)， Mohawk及Scleraxis的mRNA水平均高于hAMSCs（P＜0.05）。 2）酶切产物、菌液PCR检测均显示条带大小为600bp，梯度法转染293T细胞后筛选出滴度为1×108TU/μL的病毒原液。以6.5μL病毒原液转染hAMSCs 96h后荧光表 达量示转染良好，并以3.5μg/mL浓度的puromycin对细胞进行筛选。RT-PCR显示过表达组Scx表达量在3天、7天均高于空质粒组（P＜0.05），7天时Scx表达量高于3天（P＜0.05）。Westen Blot显示转染组Scx蛋白表达量高于空质粒组。 3）PCR显示hAMSCs转染Scx后III型胶原、赖氨酰氧化酶-1（LOX-1）、纤维连接蛋白（Fibronectin）、腱调蛋白（Tenomodulin，Tnmd）核心蛋白聚糖（Dceorin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、和细胞连接素（Tenascin-C）的mRNA表达水平于3d、5d和7d时高于空质粒组（P＜0.05），但仍低于hLFs组（P＞0.05）；而I型胶原荧光5天时强于各组,但7天时与hLFs组表达量无明显差异。Western blot结果显示各组I、III型胶原，纤维连接蛋白和细胞连接素的分泌水平随时间的延长而增强，实验组和hLFs组表达量均高于空质粒组（P＜0.05）。免疫荧光染色发现每组的I型胶原及Fibeonectin表达量随时间增长，hLFs组表达量在3d和7d时分泌量均高于过表达组和空质粒组。过表达组细胞与Matrigel水凝胶混合并移植裸鼠皮下28d后未见明显炎症反应，HE染色示细胞排列更为紧密与规则，形态趋近于正常韧带组织。 结论：1) 酶消化和贴壁法体外培养的hAMSCs具有MSC的表型和特性。hLFs体外增殖能力 hAMSCs 较弱但韧带相关基因表达水平较强高,证实 Scleraxis 为 hAMSCs和hLFs的差异性基因。 2）构建的Scleraxis基因慢病毒载体在体外转染hAMSCs后能稳定表达且不影响细胞的增殖能力，成功建立了稳转细胞系。 3）慢病毒介导Scx转染hAMSCs后能够提高韧带相关基因和蛋白的表达水平，分化形态更趋向成纤维细胞，体内移植后无明显炎症反应。