【摘 要】
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奶牛乳腺炎是一种复杂的综合性乳腺疾病。它病因复杂,可由多种病原微生物侵入乳腺而引起,所以防治不易。目前,关于β-防御素的抗乳房炎作用的研究很少。本研究首先采用胶原酶
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奶牛乳腺炎是一种复杂的综合性乳腺疾病。它病因复杂,可由多种病原微生物侵入乳腺而引起,所以防治不易。目前,关于β-防御素的抗乳房炎作用的研究很少。本研究首先采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择消化法,对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行了分离、培养和纯化,并利用形态学、核型分析和荧光定量RT-PCR检测α-酪蛋白等方法对所培养乳腺上皮细胞进行了鉴定。随后,通过添加代表大肠杆菌为主要侵染力的脂多糖(LPS)建立了实验性乳房炎的乳腺上皮细胞模型,并采用实时荧光定量RT-PCR方法检测乳腺上皮细胞中细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α及α-酪蛋白和β-防御素(BNBD5)mRNA的表达水平。研究结果显示,添加LPS后乳腺上皮细胞中炎性因子IL-6、IL-12和TNF-α的mRNA表达量与空白对照组相比显著增加(p<0.01),并且α-酪蛋白mRNA表达量显著降低(p<0.01),说明添加LPS诱发上皮细胞产生了一定的炎性。并且添加LPS刺激乳腺上皮细胞后,乳腺上皮细胞中BNBD5 mRNA的表达量存在着时间和剂量效应,并表现出一定的规律。当脂多糖终浓度为300ng/mL并培养48h后BNBD5的表达量最高,与空白对照组间存在极显著差异(p<0.01),推测BNBD5基因可能参与了由LPS诱发的奶牛乳房炎的防御机制。本研究结果将为进一步研究β-防御素的抗乳房炎作用奠定基础。
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