本文利用E.coli原核表达系统对新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）裂解位点区域(fusion glycoprotein cleavage-activation site region，F_CASR)基因进行了串联表达，并应用表达产物及其多肽抗体分别对NDV强弱毒株抗血清和NDV强弱毒株进行间接ELISA分析。该研究对新城疫病毒强弱毒株的鉴别诊断进行了有益的探索。主要研究内容如下： 1．人工设计，分段合成97bp的双链核苷酸序列（该序列编码产物含有NDV强毒株F蛋白裂解位点区域14个氨基酸的两个重复，中间通过两个疏水性氨基酸作为linker进行串联），将合成的基因片段分别磷酸化，两两退火后，克隆入融合表达载体pET-32a（+），并转化大肠杆菌BL21，用IPTG进行诱导表达，SDS-PAGE电泳可见约23.6kD大小的融合蛋白。将筛选到的重组阳性克隆命名为pET-F。经序列测定分析表明克隆基因与人工合成设计的基因序列一致。 2．将重组融合表达载体pET-F转化大肠杆菌BL21，挑取阳性克隆培养，通过摸索不同诱导时间、不同IPTG浓度，对融合蛋白的表达条件进行了优化，优化后的条件为：37℃振荡培养，待细菌生长至OD₆₀₃为0.4～0.6时（大约需2～3h），加入IPTG至终浓度为0.1mM，30℃继续振荡培养2～3h。由于诱导温度较低并且所表达的融合蛋白分子量较小，所以融合蛋白以可溶性的形式存在。经螯和亲和层析纯化了该融合蛋白，为以后进一步研究提供了方便。另外，本研究将表达产物进行SDS-PAGE，然后回收目的条带制备抗原，并免疫家兔，制备抗血清，经Western-blotting检测结果显示抗体滴度较高。 3．利用纯化的目的蛋白对NDV强毒株F48E10和Ⅳ系疫苗株的抗血清进行间接ELISA检测，同时比较了OPD和TMB两种底物显色结果的差异。试验结果显示：F48E10强毒株和Ⅳ系疫苗株抗血清均有反应梯度，但Ⅳ系疫苗株抗血清反应比F48E10强毒株抗血清稍强；以OPD作底物时的OD值明显大于以TMB作底物时的OD值。另外，本研究通过兔抗NDV强毒株F_CASR多肽抗体与NDV强毒株F48E10和Ⅳ系疫苗株的间接ELISA分析，比较了该多肽抗体与NDV强弱毒株的反应性，结果反应性高低依次为：Ⅳ系疫苗株＞F48E10株＞F48E10株（0.1％胰酶处理）＞Ⅳ系疫苗株（0.1％胰酶处理）。