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通过白斑症病毒(WSSV)与对虾血细胞膜的体外结合方法和对虾血细胞原代培养的方法,从研制出的抗对虾血细胞的单克隆抗体中,筛选出抗WSSV受体的单克隆抗体,并用Western blot和亲和层析方法鉴定了WSSV受体的分子量。实验结果如下: 利用WSSV和对虾血细胞膜体外结合的DOT BLOT方法,从抗中国对虾血细胞的单克隆抗体中筛选出单克隆抗体4D8具有部分封闭WSSV和对虾血细胞膜结合的作用。对虾血细胞膜和有部分封闭作用的单克隆抗体4D8反应,再和地高辛标记的WSSV(WSSV-DIG)孵育,由于部分受体被封闭使WSSV-DIG无法与其结合,由DOT BLOT得到的结果颜色较浅;对虾血细胞膜和无封闭作用的单克隆抗体反应,再和WSSV-DIG孵育,由于WSSV-DIG与对虾血细胞膜上的所有受体结合,由DOT BLOT得到的结果颜色较深。 利用WSSV和对虾血细胞膜体外结合的ELISA方法,对单克隆抗体4D8的封闭效果进行了定量分析。对虾血细胞膜和无封闭作用的单克隆抗体反应,再和WSSV-DIG孵育,由于WSSV-DIG与对虾血细胞膜上的所有受体结合,由ELISA得到的OD值较大,为0.423;对虾血细胞膜和有封闭作用的单克隆抗体4D8反应,再和WSSV-DIG孵育,由于部分受体被封闭使WSSV-DIG无法与其结合,由ELISA得到的OD值较小,为0.256,占受体不被封闭所得OD值的41%。 用对虾血细胞原代培养的方法对单克隆抗体4D8的封闭效果进一步验证:与无封闭作用的单克隆抗体孵育的原代培养的血细胞,经WSSV感染后,第3天就表现出了病理变化;与有封闭作用的单克隆抗体4D8孵育的原代培养的血细胞,经WSSV感染后,出现病理变化较晚,第5天才表现出了病理变化。实验结果表明:单克隆抗体4D8能封闭部分WSSV受体,从而延缓了WSSV对原代培养血细胞的感染进程。 经Western blot和亲和层析技术鉴定,抗WSSV受体的单克隆抗体4D8在中国对虾血细胞膜上识别的WSSV受体的分子量为175kDa。单克隆抗体4D8在日本对虾血细胞上识别的抗原决定簇分子量为175kDa,在凡纳滨对虾血细胞上识别