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Aβ42(β amyloid peptide,Aβ42)是由42氨基酸组成的β淀粉样多肽,它是阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)的重要生物标志物。实验发现患者脑脊液中Aβ42含量明显下降,因此,测定脑脊液中Aβ42含量对阿尔兹海默症的诊断有重要作用。针对阿尔兹海默患者的临床检测以成像法和免疫法为主,这两种方法的优势是快速,便捷。但是都不能绝对定量,这意味着同一患者用不同方法或者不同实验室检测结果可能不同。因此,建立绝对定量分析Aβ42的方法及相关标准物质的研制对AD的早期诊断及药物研发有重要意义。本工作的主要内容包括:(1)建立液相色谱-同位素稀释质谱(HPLC-IDMS)在线联用技术,通过对Aβ多肽中目标氨基酸的测量,实现了β淀粉样多肽的准确定量分析。首先,通过优化水解时间、温度及酸用量,确定了 Aβ最佳水解条件。其次,对离子对、电压和碰撞能等方面进行优化,确定了氨基酸的质谱检测条件。最后,根据同位素稀释法的公式以及Aβ中目标氨基酸含量,得到β淀粉样多肽中Aβ的含量。(2)建立柱后同位素稀释法-电感耦合等离子体质谱联用(ID-ICPMS),通过对β淀粉样多肽中硫元素的测量,实现了 β淀粉样多肽的准确定量分析。通过优化4种液相色谱条件将β淀粉样多肽纯品中的Aβ42与杂质进行分离。其中,通过分离Aβ42可以发现,NaH2PO4-Na2HPO4组成的缓冲盐体系对Aβ的分离效果较好,因此可以通过改变两者比例,实现Aβ40和杂质的分离。将液相洗脱后Aβ的与34S稀释剂在线混合,针对34S稀释剂对34S/32S信号强度和灵敏度的影响,对34S稀释剂的流速进行了优化,并引入响应因子(f)校正样品检测过程中质谱的响应情况(F)。最终,根据同位素稀释法的公式以及Aβ中硫元素含量,得到β淀粉样多肽中 Aβ 的含量 0.759±0.014 g g-1(Aβ42)和 0.757±0.015 g g-1(Aβ40)。ID-ICPMS研究结果表明:在0.2-2.2 μg g-1范围内,线性相关系数>0.99,检出限为 156 pg g-1(Aβ42),162 pg g-1(Aβ40),定量限为 520 pg g-1(Aβ42),540 pg g-1(Aβ40)。目标物的回收率均在95%-106%之间,相对标准偏差均小于6%。本样品采用HPLC-IDMS的测量结果为0.761±0.020 g g-1(Aβ42),0.760±0.023 g g-1(Aβ40),两种方法的测量结果一致性良好。相比于HPLC-IDMS分析方法,该方法在检出限和灵敏度上均有提高,相对标准偏差更小,且具有溯源性。(3)将实验中建立的HPLC-IDMS和ID-ICPMS方法应用于β淀粉样多肽标准物质的研制。用已建立的方法对β淀粉样多肽标准物质联合定值,为保证用户使用过程中标准物质量值稳定,考察了标准物质候选物的均匀性和储存过程中的稳定性。均匀性检验包括样品间均匀性和瓶内均匀性,F检验表明标准物质候选物的均匀性良好。按照一定的时间间隔进行稳定性检测,短期稳定性检验温度为-20、-4℃,长期稳定性检验温度为-70℃,t检验表明标准物质候选物的稳定性良好。本工作分别建立了基于质谱技术的HPLC-IDMS和ID-ICPMS方法定量β淀粉样多肽,并确定了 Aβ的最佳水解条件、目标氨基酸的质谱检测条件、Aβ液相色谱分离条件。最终将定量方法应用到β淀粉样多肽标准物质的研制,该标准物质可用于Aβ检验方法的验证、检验结果的量值溯源以及阿尔兹海默症诊断。