【摘 要】
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目的:用牙龈间充质干细胞（GMSCs）与T淋巴细胞（Jurkat T）直接接触共培养的上清液培养小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1）,观察其对MC3T3-E1细胞成骨性能的影响。以探讨GMSCs在炎症微环境下通过对T淋巴细胞的调节作用对成骨的影响,从而为GMSCs应用于牙周组织工程学提供依据。方法:从人牙龈组织中分离获得GMSCs并对其进行鉴定。然后将GMSCs与活化的Jurkat T淋巴细胞直接
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目的:用牙龈间充质干细胞（GMSCs）与T淋巴细胞（Jurkat T）直接接触共培养的上清液培养小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1）,观察其对MC3T3-E1细胞成骨性能的影响。以探讨GMSCs在炎症微环境下通过对T淋巴细胞的调节作用对成骨的影响,从而为GMSCs应用于牙周组织工程学提供依据。方法:从人牙龈组织中分离获得GMSCs并对其进行鉴定。然后将GMSCs与活化的Jurkat T淋巴细胞直接接触共培养,以单独培养活化Jurkat T淋巴细胞为对照,通过CCK-8实验检测与GMSCs共培养对Jurkat T淋巴细胞增殖的影响,通过q RT-PCR检测促炎因子白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）以及抗炎因子白介素-10（IL-10）m RNA的相对表达量,并收集上清液用于后续实验。对MC3T3-E1细胞培养分为3组,分别为:共培养组（以下简称A组）,用含有两种细胞共培养的上清液的培养基培养;Jurkat T淋巴细胞组（以下简称B组）:用含有Jurkat T淋巴细胞培养的上清液的培养基培养;对照组（以下简称C组）:用普通培养基培养。在培养的3d、7d,用q RT-PCR分别对三组中MC3T3-E1细胞Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）、碱性磷酸酶（ALP）、Runx相关转录因子2（Runx2）m RNA相对表达量进行检测;用免疫荧光染色检测骨桥蛋白（OPN）、COL-Ⅰ的表达,以评估三种培养液对MC3T3-E1细胞成骨性能影响。结果:利用酶消化法和有限稀释法成功分离获得GMSCs并对其进行鉴定。CCK-8结果显示:GMSCs可以抑制活化Jurkat T淋巴细胞的增殖,且这种抑制作用与细胞数量呈正相关。q RT-PCR显示:与GMSCs共培养可以降低IL-1β、TNF-αm RNA的表达,促进IL-10的表达（P<0.05）。对于MC3T3-E1的q RT-PCR结果显示:无论是培养的3d还是7d,A组的COL-Ⅰ、ALP、Runx2的m RNA相对表达量均高于B组,但是A组和B组上述因子相对表达量都低于C组（P<0.05）。OPN、COL-Ⅰ的免疫荧光染色结果显示:在3d组,COL-Ⅰ的平均荧光强度为C组>A组>B组,但是A、B两组之间的差异无统计学意义（P>0.05）;在7d组,COL-Ⅰ的平均荧光强度为C组>A组>B组（P<0.05）。OPN的平均荧光强度在3d和7d具有相同的趋势,为:C组>A组>B组（P<0.05）。结论:1、利用酶消化法和有限稀释法成功从牙龈中分离获得具有间充质干细胞特性的人牙龈间充质干细胞。2、牙龈间充质干细胞可以抑制活化的Jurkat T淋巴细胞的生物活性,可下调促炎因子（IL-1β、TNF-α）的表达,上调抗炎因子（IL-10）的表达,可以抑制活化Jurkat T淋巴细胞增殖。3、牙龈间充质干细胞调节活化Jurkat T淋巴细胞的生物活性可以减轻炎症微环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的抑制作用。
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