【摘 要】
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钩端螺旋体是全世界关注的传染病源菌体之一，其全基因组的测序已经完成。L11是组成核糖体的蛋白之一，它与23SrRNA结合，调节核糖体的装配，进一步影响蛋白质的表达，L11的甲基化修饰对核糖体的功能有一定的影响。为了研究钩端螺旋体中L11甲基化位点及其功能，设计了PrmA和liL11及其甲基化位点突变体的引物，通过酶联聚合反应（PCR）从钩端螺旋体基因组DNA中扩增得到liPrmA和liL11以及l
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钩端螺旋体是全世界关注的传染病源菌体之一，其全基因组的测序已经完成。L11是组成核糖体的蛋白之一，它与23SrRNA结合，调节核糖体的装配，进一步影响蛋白质的表达，L11的甲基化修饰对核糖体的功能有一定的影响。为了研究钩端螺旋体中L11甲基化位点及其功能，设计了PrmA和liL11及其甲基化位点突变体的引物，通过酶联聚合反应（PCR）从钩端螺旋体基因组DNA中扩增得到liPrmA和liL11以及liL11突变体的基因编码序列，克隆到pET系列原核表达载体中，构建了9个载体，pET22b-PrmA、pET28a-liL11、pET28a-liL11-△2、pET28a-liL11-△4、pET28a-liL11-Ⅰ、pET28a-liL11-Ⅱ、pET28a-liL11-Ⅲ、pET28a-liL11-Ⅳ、pET28a-liL11-Ⅴ。分析了liPrmA蛋白表达的最佳条件，纯化上述蛋白，将liL11以及甲基化突变的liL11分别与liPrmA在SAM[~3H]存在条件下酶活反应，放射自显影。设定了1％、2％、3％3个NaCl梯度，将pET28a、pET28a-liL11、pET28a-liL11-△4三种质粒分别转入到E．coli中，对E．coli的生长克隆数进行统计和分析。结果显示：（1） 钩端螺旋体liPrmA在E．coli中表达的最佳表达条件：诱导前温度37℃、摇床转速200r／min、吸光值(OD600)0.6，诱导后温度25℃、诱导物IPTG浓度0.6mM、诱导时间12h。（2）liL11-△2、liL11-Ⅱ、liL11-Ⅲ、liL11-Ⅳ、liL11-Ⅴ是能被liPrmA甲基化，判断钩端螺旋体liL11N端的第3、4、7、10位的Lys-的ε位上的氨基被liPrmA甲基化。（3） NaCl浓度为2％或3％条件下，E．coli生长量在转入pET28a-liL11时比转入pET28a-liL11-△4增加了21％或22％，说明NaCl胁迫下liL11甲基化可以促进E．coli菌体的生长。研究结果对进一步深入认识钩端螺旋体的致病分子机理和有效防治钩体病有一定的参考。
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