湖羊是我国一级保护地方品种,主要产于浙江嘉兴和太湖流域,具有早熟、生长发育快、四季发情、一年两胎等优良特性。加速湖羊的规模化养殖不仅可以提高养殖户的经济效益,而且可以弥补我国羊肉不足的短板。人工授精（AI）对家畜的规模化养殖和节约饲养成本具有重要意义,而精液保存质量是进行人工授精的关键。目前精液保存方式分为三种:常温保存（15～25℃）、低温保存（0～5℃）和冷冻保存。低温保存因操作简单、成本低和保存效果较好等特点而在生产实践中得到广泛应用。精液低温保存过程中会产生大量活性氧（ROS）,严重影响精子结构和功能。因此,添加外源性抗氧化剂成为有效提高精液保存质量的方法之一。本试验研究了四种绵羊精液低温保存稀释液,筛选出适合湖羊精液低温保存的稀释液配方。其次,在筛选出的最佳稀释液中分别添加0.2、0.4、0.8、1.2 mg/mL的绿原酸（CGA）,通过迈朗全自动精子分析系统（CASA）检测精子活率、活力、直线速率（VSL）等动力学参数,应用低渗肿胀试验（HOST）检测精子质膜完整性,用染色法检测精子顶体完整性,同时借助多模式微孔板检测系统测定精液不同保存时间点的过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、ROS、丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）和三磷酸腺苷（ATP）浓度,筛选出CGA在湖羊精液低温保存稀释液中的最佳添加浓度。本研究主要获得以下结果:1.本研究比较了四种不同组成成分的绵羊精液稀释液,“稀释液Ⅳ”的保存效果最佳,其组成成分为:Tris 3.07 g,柠檬酸1.64 g,果糖2.00 g,青霉素钠10万IU,链霉素硫酸盐10万IU,10%卵黄和90 mL的超纯水。精液保存第3～7 d时,“稀释液Ⅳ”组的精子活率显著高于其他三种稀释液组（P＜0.05）。保存第5 d时,“稀释液Ⅳ”组的精子活力达到74.96%,显著高于其他三种稀释液组（P＜0.05）。保存1～7d时,“稀释液Ⅳ”组的精子质膜完整性显著高于其他三种稀释液组（P＜0.05）,“稀释液Ⅰ”组显著高于“稀释液Ⅱ”和“稀释液Ⅲ”组（P＜0.05）。保存第7 d时,“稀释液Ⅳ”组的精子顶体完整性显著高于其他三种稀释液组（P＜0.05）。由此可见,“稀释液Ⅳ”是湖羊精液低温保存的最佳稀释液。因此,将“稀释液Ⅳ”作为后续试验的基础稀释液。2.以“稀释液Ⅳ”为基础稀释液分别添加0.2、0.4、0.8和1.2 mg/mL的CGA。结果表明,随着CGA浓度的升高,精子活率、活力等动力学参数、质膜完整性和顶体完整性呈先上升后下降的趋势,且0.8 mg/mL的CGA作用效果最佳。精液保存第5 d时,所有CGA添加组的精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性显著提高（P＜0.05）。保存第7 d时,0.8 mg/mL CGA添加组的精子质膜完整性和顶体完整性分别为61.15%和75.88%。保存第9 d时,0.8 mg/mL CGA添加组的精子活率和活力分别达到68.18%和57.04%,均显著高于对照组（P＜0.05）。3.在“稀释液Ⅳ”中添加不同浓度的CGA,检测精液保存不同时间点精子ROS、MDA含量、CAT、SOD活性、ATP浓度和T-AOC。结果表明,添加CGA显著降低了精子ROS含量（P＜0.05）。精液保存第1、3和5 d时,0.8 mg/mL CGA显著提高了CAT、SOD活性、ATP浓度和T-AOC,降低了精子ROS和MDA含量（P＜0.05）。这表明,0.8 mg/mL CGA可以通过减少ROS的积累,有效缓解ROS对低温保存湖羊精子的损伤。由以上三个结果可知:在四种绵羊精液稀释液中,经“稀释液Ⅳ”稀释保存的湖羊精液的保存效果最好,以“稀释液Ⅳ”为基础稀释液添加0.8 mg/mL CGA可以显著缓解氧化应激对湖羊精子的影响,提高低温保存的精液质量。这可以为湖羊精液体外保存和人工授精提供理论参考。