【摘 要】
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目的:探讨肾脏缺血/再灌注（ischemia-reperfusion I/R）损伤中,G蛋白偶联雌激素受体.（G protein-coupled estrogen receptor GPER）对大鼠肾小管上皮细胞凋亡产生的影响,及有关机制。方法:（1）选择SPF级雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠32只,首先将全部雌性SD大鼠禁食水八小时后麻醉,手术摘除两侧卵巢（ovariectomiz
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目的:探讨肾脏缺血/再灌注（ischemia-reperfusion I/R）损伤中,G蛋白偶联雌激素受体.（G protein-coupled estrogen receptor GPER）对大鼠肾小管上皮细胞凋亡产生的影响,及有关机制。方法:（1）选择SPF级雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠32只,首先将全部雌性SD大鼠禁食水八小时后麻醉,手术摘除两侧卵巢（ovariectomized OVX）。术后常规饲养两周后随机分为4组,8只每组。第一组OVX组;第二组OVX+I/R组;第三组OVX+I/R+G1（GPER.的激动剂）组;第四组OVX+I/R+G15（GPER.的阻断剂）+G1组。OVX组:不干预,常规饲养后取材。OVX+I/R组:摘除右.侧肾脏,裸化左肾动脉并夹闭,倒计时45min后去除腹腔内动脉夹,再灌注一天,成功制备OVX大鼠肾脏I/R损伤模型后备用。OVX+I/R+G1组:经腹腔注射给予G1干预（120μg/kg·d）,连续3d,余下步骤同OVX+I/R组行大鼠肾脏I/R损伤模型制备。OVX+I/R+G15+G1组:经腹腔注射给予G15阻断剂（300μg/kg·d）,30min后给予腹腔注射G1干预（120μg/kg·d）,连续3d,余下步骤同OVX+I/R组行大鼠肾脏I/R损伤模型制备。各组大鼠造模成功后常规饲养一天,取腹正中切口行腹主动脉采血后立即取出左侧肾脏。（2）测定各组大鼠动脉血清肌酐（SCr）、动脉血清尿素氮（BUN）、乳酸脱氢酶（LDH）水平评价肾功能。（3）肾脏组织.苏木精-伊红染色及Paller。评分共同评估肾损伤程度。（4）免疫组.织化学技术检测抗凋亡和促凋亡蛋白在肾皮髓交界区的表达位置及表达水平。（5）Western-blot.检测肾组织凋亡相关蛋白的表达水平。结果:（1）相比OVX组,OVX+I/R组大鼠血清SCr,BUN,LDH水平明显升高（P<0.01）;与OVX+I/R组相比,G1干预组血清SCr,BUN,LDH水平明显下降（P<0.01）;G15干预可阻断G1的干预作用（P<0.01）。（2）HE染色结果:相比OVX组,OVX+I/R组皮髓交界区肾小管明显扩张,小管结构大多不清,上皮细胞有明显核脱落、水肿、凋亡,有管腔阻塞及管型的出现,刷状缘可见损伤脱落,Paller评分升高提示肾小管结构损伤严重（P<0.01）。G1干预后可见肾小管轻度扩张,胞细形态较I/R组坏死脱落减少,Paller评分下降提示肾小管损害明显减轻（P<0.01）。G15阻断剂组逆转了G1激动GPER后的保护作用（P<0.01）。（3）免疫组织化学技术结果:相比OVX组,OVX+I/R组抑制了Bcl-2。蛋白的阳性表达,促进了Caspase-3。蛋白的阳性表达;较OVX+I/R组,G1干预后明显促进了。Bcl-2。蛋白的阳性表达,抑制了Caspase-3。蛋白的阳性表达;同时G15阻断剂能够逆转这种状况。（4）Western Blot.结果:OVX+I/R。组相较OVX组,降低了蛋白.Bcl-2的表达量（P<0.01）,明显升高蛋白.Cleaved Caspase-3。的表达量（P<0.01）。G1干预后升高了蛋白。Bcl-2的表达量（P<0.01）,降低了蛋白。Cleaved Caspase-3。的表达量（P<0.01）。G15。阻断剂组可部分逆转。G1。的干预作用（P<0.01）。结论:GPER可以通过减少肾小管上皮细胞凋亡。来减轻肾脏I/R损伤,进一步验证了G1。激活GPER后对肾脏。I/R。损伤的保护作用,其机制可能是通过调控凋亡通路实现的。
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