【摘 要】
：
目的:Cornelia de Lange综合征（Cd LS）是一种遗传性疾病,目前研究表明NIPBL基因是其主要的致病基因。NIPBL基因突变可能导致其骨骼发育异常。因此,本研究通过体外细胞学实验,探究NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞的增殖分化能力的影响。为进一步探索Cd LS的发病机制以及新治疗方案的确定提供理论依据和实验依据。方法:采用第三代c57小鼠骨髓间充质干细胞进行实验。构建3种携带
论文部分内容阅读
目的:Cornelia de Lange综合征（Cd LS）是一种遗传性疾病,目前研究表明NIPBL基因是其主要的致病基因。NIPBL基因突变可能导致其骨骼发育异常。因此,本研究通过体外细胞学实验,探究NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞的增殖分化能力的影响。为进一步探索Cd LS的发病机制以及新治疗方案的确定提供理论依据和实验依据。方法:采用第三代c57小鼠骨髓间充质干细胞进行实验。构建3种携带NIPBL-si RNA的慢病毒载体后转染细胞,通过倒置相差荧光显微镜观察慢病毒转染结果,使用real-time PCR来检测NIPBL基因的m RNA表达量,根据PCR的结果选择效果最好的一种慢病毒载体作为实验组。后续实验分组为:抑制NIPBL基因表达的实验组、阴性对照组和空白对照组。慢病毒转染后,CCK-8法检测转染后各组细胞增殖能力。分别将转染后各组细胞进行成骨诱导、成软骨诱导、成脂诱导分化培养。分别在诱导的第7天、14天、21天提取3组细胞的RNA和蛋白,用RT-PCR、western blot检测OCN、BMP-2、RUNX-2、SOX-9、COL2A1、PPAR-γ基因的m RNA及蛋白表达水平。检测碱性磷酸酶活性,观察茜素红染色钙结节、阿利辛蓝染色软骨细胞、油红O染色脂质细胞的结果。结果:（1）三种慢病毒载体转染小鼠骨髓间充质干细胞的结果:慢病毒介导NIPBL基因转染骨髓间充质干细胞后,real-time PCR检测结果显示NIPBL基因m RNA表达量明显降低（P<0.05）,其中以NIPBL-si RNA-3沉默效果最佳,用其进行后续实验研究。（2）转染后各组细胞增殖能力比较:NIPBL基因沉默后,CCK8检测结果显示实验组细胞增殖能力较对照组明显降低（P<0.05）,证明沉默NIPBL基因后降低骨髓间充质干细胞的增殖能力。（3）成骨诱导培养及相关基因表达情况的比较:成骨诱导培养后,在第7天、14天、21天提取各组细胞的m RNA和蛋白,real-time PCR和western blot实验结果显示:OCN、BMP-2、RUNX-2的m RNA和蛋白表达量在实验组中要比对照组低（P<0.05）,实验组ALP活性明显降低,茜素红染色钙结节在实验组中要比对照组低（P<0.05）。（4）成软骨诱导培养及相关基因表达情况的比较:成软骨诱导培养后,在第7天、14天、21天提取各组细胞的m RNA和蛋白,real-time PCR和western blot实验结果显示:SOX-9、COL2A1的m RNA和蛋白表达量在实验组中要比对照组低（P<0.05）,阿利辛蓝染色结果显示软骨细胞在实验组中要比对照组少（P<0.05）。（5）成脂诱导培养及相关基因表达情况的比较:成脂诱导培养后,在第7天、14天、21天提取各组细胞的m RNA和蛋白,real-time PCR和western blot实验结果显示:PPAR-γ的m RNA和蛋白在实验组中的表达量要比对照组低（P<0.05）。油红O染色结果显示脂质积累在实验组中要比对照组少（P<0.05）。结论:慢病毒介导沉默NIPBL基因后小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力降低,抑制其向成骨、成软骨和成脂分化,降低了骨髓间充质干细胞增殖分化能力。
其他文献
目的:探讨SNCG在卵巢正常组织以及卵巢癌组织中表达水平的差异性,分析SNCG蛋白在人卵巢癌中的表达状态。进一步分析SNCG在人卵巢癌中的表达情况与其临床病理特征、化疗治疗效果以及预后的关系,以期为临床上诊治卵巢癌患者提供特异性监测指标。方法:1.回顾性收集2010年1月至2015年1月间在石河子大学医学院第一附属医院确诊的具有完整临床病理资料的119例卵巢恶性肿瘤患者以及50例正常卵巢患者的石蜡
目的:通过免疫组化法（Immunohistochemistry,IHC）检测IL-6、p-Stat3、PD-1和PD-L1在胃癌及正常胃粘膜的染色情况,探讨联合检测指标对胃癌患者生存预后的预测能力。方法:（1）回顾性收集2008-2016年石河子大学医学院第一附属医院胃癌术后病例共205例,获取患者的石蜡组织标本与临床病理资料;（2）此次研究最后随访日期为2019年10月1日;（3）将胃癌组织排列
目的:探究新疆地区类风湿关节炎（RA）合并抑郁的患病率及相关危险因素。方法:回顾性分析2020年01月到2020年12月就诊我科的RA患者的姓名、性别、年龄、身高、体重、民族、文化程度、婚姻情况、职业等,并从我院住院系统中调取患者1年内住院次数及每次住院的医疗支出。抑郁状态使用医院用焦虑抑郁量表（HADS）评估,健康调查简表（SF-36）评价生活质量,患者睡眠质量采用匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQ
目的:课题组前期研究发现,与非癌个体相比,前列腺癌（Prostate cancer,PCa）患者血清辛酸（FFA C8:0）含量显著升高。本研究在收集前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）与PCa患者前列腺组织,以及构建高脂饮食诱导的肥胖前列腺荷瘤小鼠模型基础上,检测肿瘤组织中KLF7、IL-6及肿瘤发生相关因子p21、Ki67的表达情况,并分析上述因子与P
目的本研究在循证医学方法的基础上,通过流行病学研究探讨新疆兵团地区女性乳腺癌发病的影响因素,特别是人为可控因素。方法1.Meta分析通过检索Pub Med、Web of science、The Cochrane library、中国知网、维普、万方数据库,收集2009年1月1日～2019年12月31日公开发表的关于中国女性乳腺癌危险因素研究的文献,对符合纳入排除标准的文献进行Newcastle-O
目的:采用三维动脉自旋标记（3D-Arterial Spin Labeling,3D-ASL）成像技术探讨创伤后应激障碍患者（Post-traumatic Stress Disorder,PTSD）[1]是否存在区域脑血流量（Regional Cerebral Blood Flow,r CBF）灌注异常,并进一步探讨异常r CBF脑区与PCL-5量表[2]评分的相关性?研究方法:纳入2019年8月
目的:探讨胃癌肿瘤微环境中M2型巨噬细胞通过IL-6/STAT3信号通路介导肿瘤细胞干性在胃癌演进过程的作用机制。方法:运用生物信息学CIBERSORT对TCGA中胃癌数据进行筛选并分析肿瘤微环境中各免疫细胞的分布特征;应用多重荧光免疫组化（m IHC）标记并验证关键免疫细胞在胃癌进展和预后评估中的作用。应用免疫组化法检测胃癌干性标记物（CD44,ALDH1）的表达情况,分析其在胃癌浸润、转移及预
目的:1.研究不同年龄阶段患者子宫内膜息肉的恶变率。2.研究子宫内膜息肉及围绝经期患者子宫内膜息肉恶变的相关危险因素。方法:选取2017年1月—2020年1月于新疆维吾尔自治区人民医院行宫腔镜下子宫内膜息肉切除术的患者,术后标本送病检,术后病理结果诊断为EPs的患者1132例。根据患者年龄、绝经状态分为<40岁组336例、围绝经期组488例、绝经组308例。采用单因素和多因素Logistic回归分
目的:探讨接受阿替普酶静脉溶栓治疗急性脑卒中患者发生早期神经功能恶化（early neurological deterioration,END）的相关影响因素。方法:回顾性分析2010年01月-2018年12月在石河子大学医学院第一附属医院神经内科卒中单元连续收治的发病4.5小时内接受阿替普酶静脉溶栓治疗的急性脑卒中住院病人。在阿替普酶静脉治疗前及静脉溶栓后72h内对患者进行评分评估,依据是否出现
目的探究精神分裂症患者不同暴力风险等级和有无暴力行为中事件相关电位P300的变化特点,并分析P300在预警精神分裂症患者暴力行为的评价作用。方法收集2019年1月～2020年8月就诊于石河子市绿洲医院的精神分裂症患者,入院后3天内完成听觉P300的检测,并对其进行为期3天的暴力风险评估同时记录患者一周内暴力行为发生的情况,将符合纳入标准的精神分裂症患者按照评估等级由低到高分为低风险组、中风险组和高