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目的：建立从胰腺癌肿瘤块中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法，研究使用HSP70多肽复合物构建树突状细胞(DC)多肽疫苗的策略及其针对胰腺癌的体外杀伤作用。方法：采用低渗裂解小鼠胰腺癌(MPC83)细胞，制备细胞裂解液，使用ConA-Sepharose亲和层析柱及ADP-Agarose亲和层析柱进行序贯分离，从细胞裂解液中纯化出HSP70多肽复合物，所获蛋白用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，Bradford法测定蛋白获得率。联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)细胞因子从小鼠骨髓细胞中诱导培养DC，用纯化出HSP70多肽复合物修饰小鼠骨髓来源的DC制备树突细胞HSP70多肽肿瘤疫苗，MTT法检测修饰后DC增殖活性。HSP70多肽复合物修饰后的DC激活小鼠脾淋巴细胞，同时采用以MPC83全细胞抗原修饰后的DC以及未经多肽修饰的DC分别激活的小鼠脾淋巴细胞作为对照组，MTT法检测各组激活淋巴细胞的增殖活性及各组淋巴细胞在不同效靶比下对MPC83的体外杀伤活性。结果：细胞裂解液经过层析获得较高纯度分子量为70KD左右的HSP70多肽复合物，从每克湿重瘤块中可以获取100μg HSP70多肽复合物。利用GM-CSF和IL-4可以从小鼠骨髓细胞中诱导培养出DC，DC随时间高表达CD11c和CD80表面标志分子。HSP70多肽复合物可以促进DC成熟，1μg HSP70多肽可修饰10~6树突细胞。来自MPC83细胞瘤块HSP70多肽复合物修饰的DC可以激活小鼠脾淋巴细胞产生特异性杀伤T淋巴细胞，能特异性杀伤MPC83细胞，且杀伤活性较使用MPC83全细胞抗原激活的T淋巴细胞以及未经多肽修饰DC激活的T淋巴细胞明显。结论：采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物，用纯化的HSP70多肽复合物修饰DC，可构建HSP多肽复合物DC疫苗。HSP多肽复合物DC疫苗用于胰腺癌细胞免疫治疗能获得体外杀伤效果，为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础。