研究背景和研究目的:非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是指除酒精和其他明确的损肝因素外的其它因素导致的以脂质在肝细胞内过度累积为主要特征的临床病理综合症,是一种与胰岛素抵抗和遗传易感性相关的获得性代谢应激性肝损伤。近年来,由于生活方式和饮食习惯的改变,NAFLD的发病率越来越高,若不加以控制,NAFLD会进一步发展为不可逆的非酒精性脂肪肝肝炎和肝硬化,最终发展为肝癌。已有研究表明,CD38是哺乳类动物细胞的主要NAD+水解酶,具有调节细胞内NAD+水平的作用,而细胞内NAD+水平改变与代谢性疾病密切相关。然而,CD38在NAFLD中的作用及其机制尚未见报道,本研究旨在探索CD38对高脂饮食诱导NAFLD的影响及其机制,为NAFLD的早期防治提供新的思路和实验依据。实验方法:1.高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝模型的制备及其分析:将8周龄的CD38肝脏特异性敲除（CD38-LKO）小鼠及对照小鼠CD38flox/flox（CD38 fl/fl）分为四组:1)WT-ND组:野生型（CD38 fl/fl）小鼠正常饮食（ND）组;2)KO-ND组:CD38-LKO小鼠正常饮食组;3)WT-HFD组:野生型（CD38 fl/fl）小鼠高脂饮食（HFD）组;4)KO-HFD组:CD38-LKO小鼠高脂饮食组。喂养16周,每周称体重,分别做葡萄糖耐受及胰岛素耐受实验。第16周后取每只小鼠相同部位的肝脏组织固定,一部分制备石蜡切片用于HE染色,分析肝脏脂滴累积情况,另一部分制备冰冻切片用于油红染色,分析脂滴的累积;取肝脏组织分析甘油三酯（TG）和丙二醛（MDA）含量及检测超氧化物歧化酶（SOD）活性;同时提取RNA和总蛋白,通过Q-PCR和Western blot检测四组小鼠肝脏组织中氧化应激及脂质累积相关基因的表达。2.肝原代细胞的分离及油酸（OA）诱导肝细胞脂质累积模型的制备及分析:1)采用在体肝脏灌流法,分离6-8周龄C57BL/6和CD38-LKO小鼠的肝原代细胞进行体外培养;2)用不同浓度的油酸刺激C57BL/6小鼠的肝原代细胞,分析CD38表达情况;3)使用0.5 m M的油酸处理C57BL/6和CD38-LKO小鼠的肝原代细胞,分析TG和MDA含量、检测SOD活性及线粒体膜电位（JC-1）;4)提取油酸处理后的原代细胞RNA和蛋白,分析氧化应激相关基因如CAT、SOD2等和脂质累积相关基因如CPT-1、ACOX1等的表达。3.HEP1-6肝细胞脂质累积模型的制备及其分析:1)通过转染flag,flag CD38质粒构建稳定过表达CD38的HEP1-6细胞系;2)对照细胞系及过表达CD38细胞系用油酸刺激24h,通过油红染色检测脂滴积累,甘油三酯试剂盒检测TG含量,丙二醛试剂盒检测MDA含量;提取RNA和蛋白检测氧化应激相关指标如SOD2、CAT等和脂质累积相关指标如CPT1、PPARα等的表达。实验结果:1.高脂饮食可明显促进野生型小鼠肝脏组织CD38的表达,油酸刺激可显著诱导小鼠肝癌细胞系及小鼠肝原代细胞的CD38表达,并呈剂量依赖型。2.全身敲除CD38基因显著降低高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂质累积。肝脏特异性敲除CD38基因明显改善肝脏组织的胰岛素耐受,HE、油红染色及甘油三酯检测显示小鼠肝脏脂质累积显著降低,氧化应激损伤明显改善,肝脏组织Sirt1及其靶基因PPARα及SOD2的表达显著增加。3.敲除肝脏细胞CD38基因可显著降低油酸刺激所致原代肝细胞甘油三酯含量增加,并通过降低丙二醛含量、增加超氧化物歧化酶活性及提高线粒体膜电位而改善氧化应激损伤。肝细胞敲除CD38基因可增加Sirt1及其脂肪酸氧化相关基因如ACOX1、CPT1及抗氧化相关基因如SOD2的表达。4.小鼠肝癌细胞系过表达CD38可显著促进油酸刺激诱导的肝细胞内甘油三酯及丙二醛含量增加,显著降低Sirt1的蛋白表达,降低脂肪酸氧化相关基因PPARα、CPT1及抗氧化相关基因SOD2、Cat的表达,增加促氧化应激蛋白NOX2的表达。结论:1.高脂饮食及油酸刺激可分别在整体及离体水平明显促进肝细胞CD38的表达。2.全身或肝脏组织特异性敲除CD38基因在体内外均可改善高脂或油酸刺激下肝细胞的脂质累积和氧化应激损伤,在肝脏细胞体外过表达CD38则可加重细胞损伤。3.肝细胞特异性敲除CD38基因可通过激活Sirt1/PPARα/SOD2信号通路降低高脂饮食或油酸刺激导致的肝脏脂质累积及氧化应激损伤。