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现有的农药多残留检测方法主要是气相色谱和高效液相色谱等仪器分析法,这些方法前处理步骤复杂,费时费力、设备昂贵,且需要专业人员操作,适宜实验室检测,但不适宜大量样品和现场快速检测。酶联免疫检测方法快速、灵敏、选择性好,适宜痕量物质的检测,同时还具有检测成本低,操作简便,安全可靠等优点。利用单克隆抗体及免疫检测技术,探索有机磷农药多残留免疫检测方法,可以为农药多残留快速检测试剂盒的开发应用提供理论依据。研究方法:利用有机合成方法将有机磷农药小分子与蛋白相连,从而制得免疫原和包被原;用合成的免疫原免疫小鼠,通过细胞培养、克隆化培养等无菌操作技术制备有机磷农药的单克隆抗体;建立检测单种农药残留的ELISA方法并验证其灵敏度、检测限、特异性、回收率及与色谱方法的差异;在单残留检测的基础上,探索食品中有机磷农药多残留的免疫检测方法。结果主要包括以下几方面:1.以毒死蜱原药和3-巯基丙酸为起始原料,通过亲核取代反应等步骤,合成了毒死蜱半抗原,再通过碳化二亚胺法与BSA、OVA反应,制备了免疫原和包被原,偶联比为20:1,符合小分子免疫的要求,从之后的实验结果也能证实此抗原合成是成功的。甲胺磷结构本身自带氨基,所以直接采用EDC法与BSA、OVA连接,但从后面的免疫、单抗制备试验发现此抗原合成方法并不理想。2.免疫毒死蜱抗原的小鼠效价可达到2 104倍,可以用于细胞融合试验;免疫甲胺磷抗原的小鼠中部分小鼠效价达104倍以上,可以进行细胞融合实验。经细胞融合技术成功建立了2株能稳定分泌抗毒死蜱单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2E4和4B9,经纯化后,获得了高纯度的单克隆抗体,用紫外分光光度法测得其含量为1.5mg/mL。对其进行抗体亚类鉴定,鉴定结果为IgG1。而分泌甲胺磷抗体的杂交瘤细胞在培养过程中阳性逐渐消失,最终没有得到甲胺磷单克隆抗体。3.利用间接竞争ELISA方法建立了检测毒死蜱单残留的标准抑制曲线,回归方程为y=0.2322x+0.4391,回归系数R2=0.9988,毒死蜱与其特异性单克隆抗体竞争性结合的半数抑制浓度IC50为1.45μg/mL,该检测法的检出限为0.027μg/mL。与甲基毒死蜱有交叉反应性,与其他6种农药无交叉反应,芦笋样品经简单前处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得芦笋中毒死蜱的添加回收率为82.6%~98.96%,与GC测定结果基本相当。4.多残留试验结果显示对硫磷与毒死蜱没有交叉反应,且将两种农药混合包被后测单种农药残留结果与两种农药的标准检测曲线一致。但测两种农药多残留总量的方法还需进一步改进。