木质素降解真菌的筛选鉴定及相关酶活性研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shanwq1983
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木质素是天然的大分子聚合物,分子量大,由松柏醇、香豆醇、芥子醇等芳香族结构单元组成,在自然界中能够长期稳定存在。大量的木质素在自然环境中存在,不仅会产生环境污染,而且也是资源浪费。随着对环境污染危机和资源综合利用等问题认识的不断深入,天然高分子材料所具有的可再生和可降解性等日益受到人们的重视。在自然界中,木质素的储量巨大,每年新产生的木质素量仅次于纤维素,达到1500亿吨/年。研究表明木质素与纤维素共同存在,影响纤维素的降解,是天然高分子材料在自然界降解的限速步骤。在自然界中木质素的降解主要通过微生物作用来完成,其中真菌是已知的主要降解木质素的微生物。部分木腐食用型真菌能够利用木材生长,具有较好的木质素降解能力,因此本论文以木腐真菌为研究对象,研究了其产酶活性、产酶条件优化、菌株鉴定、混合产酶试验及实际应用,其主要结果如下:1、通过愈创木酚试验,将从土壤中分离获得的几株生长较快的真菌(J101,J201,J301,J401,J501)与其它食用真菌进行比较,研究表明:泰灵芝、J201、黑木耳和灰树花4株真菌具有较高木质素降解活性,降解圈直径分别为40.0mm、46.7mm、42.0mm、39.7mm,显著大于其他菌株(p=0.05)。2、对泰灵芝、J201、黑木耳和灰树花的木质素降解酶产酶能力研究表明,4株菌的木质素过氧化物酶活性大小分别为121.6U、143.5U、111.6U和145.2U;锰过氧化物酶活性大小分别为108.7U、140.6U、110.9U和135.8U;漆酶活性大小分别为516.2U、2028.6U、520.3U和200.8U。对4株真菌产木质素降解酶的条件进行优化,结果发现泰灵芝、J201和黑木耳产木质素降解酶最佳条件相似,最佳产酶时间6-12天,最佳温度为30℃,最佳pH值为6-7,最佳碳氮比比值为15-20。灰树花产木质降解酶的最佳产酶时间6-12天,最佳温度为20℃,最佳pH值为5-6,最佳碳氮比比值为20。3、通过观察发现J201的形态特征为:菌丝白色,绒毛状,有横隔和分枝,有锁状联合;菌落呈圆状,边缘不整齐,反面颜色淡黄;孢子呈圆筒状、平滑、无色。分子生物学方法鉴定结果表明:菌株J201的18sRNA PCR扩增片段约为700bp,基于ITS区序列的同源性比较发现,与Trametes versicolorBAFC285相似。综合上述特征,可判定J201菌株属于Polyporales科,Polystictus,sp。4、对泰灵芝、J201和黑木耳进行不同混合产酶研究表明,质素过氧化物酶J201>泰灵芝>黑木耳>(泰灵芝+J201)>(J201+黑木耳)>(泰灵芝+J201+黑木耳)>(泰灵芝+黑木耳),差异显著(p=0.05)。锰过氧化物酶和漆酶与木质素过氧化物酶相似,因此菌株混合处理不能提高木质素酶的能力。5、4种菌株对稻壳木质素实际降解能力的测定结果显示,泰灵芝、J201、黑木耳和灰树花对稻壳木质素均有降解能力,对稻壳木质素的降解率最高分别为17.8%、34.7%、21.6%和14.3%,差异显著(p=0.05)。
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