体外共培养,分别在不同时间点消化细胞提取RNA,利用RT-q PCR检测上述基因的表达水平。结果:1、使用四种不同抗生素(ABx)混合液喂养小鼠,与对照组相比,ABx7组的小鼠体重、饮水量和饲料量急剧下降;结肠组织重量减少,长度增加;回肠组织重量增加,脾脏重量减少。HE病理切片显示,ABx处理后的结肠隐窝长度变短,且存在炎症。经过第7天之后,ABx21组以及RE组的小鼠体重、饮水量和饲料量逐渐上升;结肠重量增加,但是长度无明显差异变化;回肠和脾脏重量增加。HE病理切片显示,结肠隐窝长度轻微增加,炎症情况好转。2、通过微生物多样性16Sr DNA V3-V4高变区测序结果显示,正常小鼠的肠道微生物主要由拟杆菌门、厚壁菌门组成。与对照组相比,ABx处理7天之后,肠道微生物的多样性急剧下降,拟杆菌门和厚壁菌门的丰度显著减少,变形菌门的丰度显著增多;处理21天后,RE组的生物多样性有所增加却不能恢复至对照组水平,ABx21组的菌群组成与ABx7组相似,依然以变形菌门为主。3、在结肠的转录组测序结果中,与对照组小鼠相比,ABx处理7天小鼠的结肠基因表达水平显著改变,绝大部分差异基因表达下调。对下调差异基因进行GO功能富集和KEGG通路分析,发现主要集中在适应性和先天免疫功能方面。进一步探讨发现Nfkbia、Tnf、Il6、Reg3b、Reg3g、Stat3等与免疫密切相关的基因有显著表达差异。其中,Reg3b和Reg3g的基因及蛋白在ABx7表达明显升高,但在ABx21天后下降至对照组水平。结论:在经过ABx处理后,肠道菌群的组成显著改变,但继续延长处理时间没有增加菌群的进一步改变;机体的免疫状态会随着ABx处理时间的不同而发生改变,机体经过长期ABx处理后对改变的肠道菌群有所适应,会逐步进行一定程度的恢复;Reg3b可能会影响ABx连续处理期间,机体免疫稳态的变化;Reg3b的表达与大肠埃希氏菌的生长有关。