【摘 要】
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目的探讨卡巴胆碱（carbachol,CCH）激活M3受体在CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2低氧损伤中的作用及机制。方法正常大鼠心肌细胞系H9c2作对照组,利用CoCl2建立低氧损伤模型,选用M
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目的探讨卡巴胆碱（carbachol,CCH）激活M3受体在CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2低氧损伤中的作用及机制。方法正常大鼠心肌细胞系H9c2作对照组,利用CoCl2建立低氧损伤模型,选用M3受体特异性激动剂CCH及其特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶甲碘化物（4-diphenyl-acetoxy-N-methyl-piperidine methiodide,4-DAMP）对低氧损伤组进行干预。3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法检验细胞增殖活力;流式细胞计量术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（2’,7’-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的形态及数量的变化;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和血红素加氧酶1（heme oxygenase-1,HO-1）的蛋白表达水平。结果低氧模型组细胞凋亡率显著增高（P<0.01）,细胞增殖显著降低（P<0.01）;ROS生成显著增多（P<0.01）;HIF-1α、caspase-3和HO-1蛋白表达水平显著上调（P<0.01）。用CCH干预后细胞凋亡率明显下降（P<0.01）,细胞增殖活力明显增加（P<0.01）;ROS水平显著下降（P<0.01）;HIF-1α和HO-1蛋白表达水平显著上升（P<0.01）;caspase-3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。应用4-DAMP干预后,由CCH介导的上述相关作用被抑制。结论CCH激活M3受体抑制CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2的低氧损伤,机制可能与HIF-1α和HO-1的蛋白表达水平上调有关。
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