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目的：本课题组前期工作表明，抗磷脂抗体/抗原复合物(anti-β2GPI/β2GPI)能够刺激血液单核细胞及单核细胞株THP-1表达TF，成为抗磷脂综合征(APS)血栓形成的机制之一。Toll样受体4(TLR4)及膜联蛋白Ⅱ(ANX2)作为受体介导了上述过程。本论文重点探讨anti-β2GPI/β2GPI复合物能否激活THP-1细胞，促进炎性相关因子IL-6、IL-8及TNF-α表达，从而参与APS的病理过程，并探讨其信号转导途径是否与TLR4相关，进一步确定TLR4与ANX2、β2GPI的关系。
方法：①利用荧光定量PCR(Real-time PCR)检测anti-β2GPI/β2GPI诱导THP-1细胞TF mRNA及IL-6、IL-8、TNF-α mRNA的表达，采用免疫荧光法观察IL-6、IL-8及TNF-α蛋白分泌情况，并观察其时效关系。采用试剂盒检测细胞TF活性。②利用自制的β2GPI胶联亲和层析柱(β2GPI-Affi-Gel)分析β2GPI与THP-1细胞表面相应受体(TLR4、ANX2)结合情况。③Real-time PCR、Western蛋白印迹检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88(髓样分化因子88)、MD-2(髓样分化蛋白-2)情况。④采用TLR4特异性拮抗剂TAK242、MD-2拮抗剂紫杉醇观察是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物激活细胞，抑制促炎因子IL-6、IL-8及TNF-α的表达。
结果：①Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)显著增加THP-1细胞TF mRNA水平及TF活性(与对照比较p＜0.01)；并刺激细胞IL-6、IL-8及TNF-α mRNA的表达，刺激效应显示时间依赖性，于刺激2 h时达到高峰(p＜0.01 vs control)；细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也随刺激时间明显增加。②THP-1细胞表面的TLR4及ANX2能够结合于β2GPI-Affi-Gel柱，从而被洗脱下来。③Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2明显升高(与对照比较p＜0.01)。④TAK242(5μM/L)、紫杉醇(1μmol/L)能够拮抗anti-β2GPI/β2GPI复合物对细胞的刺激效应，降低细胞促炎因子IL-6、IL-8及TNF-α的表达(与无拮抗剂比较p＜0.01)。
结论：
1.Anti-β2GPI/β2GPI复合物不仅刺激人单核细胞株THP-1细胞表达TF、还增加炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达，提示aPL也可通过上调炎性因子的表达参与APS的病理机制。
2.TLR4与ANX2作为β2GPI的共受体，介导anti-β2GPI/β2GPI复合物激活THP-1细胞的信号转导。
3.Anti-β2GPI/β2GPI复合物激活THP-1细胞表达TF及IL-6、IL-8、TNF-α过程中，TLR4及其接头蛋白MyD88、MD-2均被诱导表达增加，揭示TLR4及其信号转导通路可以作为新的靶标，用于预防和治疗APS的血栓形成等临床症状。
4.TLR4途径拮抗剂TAK242、紫杉醇能够明显抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的激活作用，抑制促凝及炎性分子的表达，为APS血栓防治提供了新思路。