目的:EphA3基因是人类最大受体酪氨酸激酶家族Eph（erythropoietin-producing human hepatocellular carcinoma,产促红细胞生成素肝细胞癌受体）基因的成员之一,参与了生长、发育和肿瘤的发生、进展和转移等方面。探讨EphA3在结直肠癌中的表达与临床病理资料的关系,以及对结直肠癌细胞生物学行为的影响。方法:本研究检测了四种肠癌细胞系、一种正常肠上皮细胞系和一组结直肠癌（164例包括肿瘤和正常组织）石蜡固定的组织标本中EphA3蛋白表达水平,分析了EphA3表达与临床病理指标之间的相关性。为了探索EphA3表达下调的分子机制,采用甲基化特异性PCR检测了四种肠癌细胞系中EphA3基因启动子区CpG岛的甲基化状态;基因测序法分析EphA3四种常见的体细胞突变;定量PCR和荧光原位杂交技术（FISH）分析EphA3基因拷贝数情况。进一步转染EphA3质粒到EphA3表达丢失的HT29肠癌细胞,通过细胞增殖、凋亡、侵袭力等体外实验,分析EphA3在肠癌细胞中的功能。结果:EphA3蛋白在四种肠癌细胞系中全部丢失;组织中,EphA3在大多数肠癌组织中表达明显低于在正常肠黏膜组织中的表达（P<0,001）。将肠癌组织中EphA3免疫组织化学染色的评分与对应的同一患者来源的正常肠黏膜免疫组化评分相比较,EphA3在82/164（50%）的肠癌肿瘤标本中表达下调,在52/164（31.7%）肠癌肿瘤标本中无差异性,在30/164（18.3%）肠癌组织标本中表达上调。EphA3的表达水平与淋巴结转移负相关（P=0.014,rs=-0.192）,与TNM分期负相关（P=0.001,rs=-0.260）。EphA3下调表达多见于老年人（P=0.013,rs=0.193）。MS-PCR在四种肠癌细胞系中扩增出甲基化产物,未扩增出非甲基化产物,显示存在EphA3启动子区CpG岛的甲基化。EphA3基因突变在四种肠癌细胞系中未被检出。EphA3的基因拷贝数包括缺失和扩增在四种肠癌细胞系中也没有发现异常。不表达EphA3的肠癌细胞HT29在转染EphA3质粒后,与空白对照和阴性对照组比较发现,细胞增殖能力减弱、侵袭力降低以及凋亡率上升,并具有明显统计学差异（P<0.05）。结论:EphA3在多数结直肠癌中表达下调,EphA3启动子区CpG岛甲基化可能是其表达下调的分子机制。EphA3的表达水平与淋巴结转移和TNM分期负相关。体外实验表明,EphA3在肠癌细胞中起着抑癌基因作用。EphA3可能是一个潜在的结直肠癌淋巴转移的预测指标,为结直肠癌靶向治疗提供新的实验依据。