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鱿鱼是一种具有高蛋白低脂肪特点的水产品,因此利用鱿鱼制备生物活性肽具有重要的意义。本文选取北太平洋鱿鱼足和阿根廷鱿鱼足,利用酶解技术,超滤分级技术制备具有抗氧化活性和血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性的多肽,并使用凝胶层析柱分离出鱿鱼足的小分子量的多肽,进一步探究北太平洋鱿鱼足多肽和阿根廷鱿鱼足多肽的抗氧化活性和ACE抑制活性。最后使用计算机方法辅助探索北太平洋鱿鱼肌球蛋白中具有抗氧化活性和ACE抑制活性的小分子肽。主要研究内容如下:(1)鱿鱼足多肽最佳酶解工艺的研究:以水解度(degree ofhydrolysis,DH)为指标,选用木瓜蛋白酶作为酶解用酶。通过响应面分析实验发现添酶量,酶解温度和液料比三个因素对响应值均具有显著性影响,得到北太平洋鱿鱼足最佳酶解条件为添酶量 1.41%(w/w),温度 51.08℃,液料比 2.26:1(v/v),酶解 6h,DH为 30.16±0.31%。阿根廷鱿鱼足的最优参数为添酶量1.43%(w/w),温度50.86℃,酶解6h,液料比2.06:1(v/v),DH为28.98±0.31%。较高DH的鱿鱼足酶解液(squidprotein hydrolysate,SPH)为后续实验提供了基础。(2)鱿鱼足多肽分离纯化技术的研究:首先测定了北太平洋SPH和阿根廷SPH的DPPH自由基清除率(20.38±0.97%和18.49±0.7%),羟基自由基清除率(9.35 ±0.57%和 7.75±0.36%),总抗氧化能力(0.070±0.003 U/mL 和 0.376±0.004 U/mL)和ACE抑制能力(45.93±0.31%和42.03±0.19%)用来评价鱿鱼足SPH的抗氧化活性和ACE抑制活性,实验结果显示北太平洋鱿鱼足的抗氧化活性和ACE抑制活性均高于阿根廷鱿鱼足。然后采用超滤分级和Sephadex G-10凝胶层析柱得到SPH-Ⅲ2对DPPH自由基清除力(DPPH自由基清除率分别为25.86±0.59%和25.95±0.56%)和ACE抑制力(ACE抑制率为75.78±0.63%和75.08±0.71%)最高。经过UPLC测定,确定北太平洋鱿鱼SPH-Ⅲ2和阿根廷鱿鱼足多肽SPH-Ⅲ2的分子量分别为634.84 Da和 637.2 Da。(3)计算机模拟产生北太平洋鱿鱼抗氧化肽和ACE抑制肽(angiotensin converting enzyme inhibitory peptide,ACEIP)的研究:使用植物蛋白酶和脯氨酰内肽酶(prolyloligopeptidase,POP)用于鱿鱼肌球蛋白重链的水解。通过BIOPEP-UWM和ATHpin数据库预测出13种抗氧化肽和126种ACEIP。然后,通过预测毒性,过敏性,胃肠稳定性和肠上皮通透性筛选出2种抗氧化肽和30种ACEIP,其中30种ACEIP包括21种已知肽和9种新肽。此外,通过分子对接评估ACEIP与ACE的相互作用机制。结果表明,ACEIP的新肽中的QY和QM对ACE具有潜在的抑制作用。它们可以通过配位键与Zn(IⅡ)结合,并通过氢键和疏水相互作用深埋在ACE的疏水口袋S1、S2和.S1’中。这项工作表明,.北太平洋鱿鱼是抗氧化肽和ACEIP.的良好来源,也可以用作在计算机中探索食源性抗氧化肽和ACE抑制肽的方案。