【摘 要】
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目的:探究慢性睡眠剥夺对小鼠学习记忆功能的影响;探究自噬在慢性睡眠剥夺小鼠海马Aβ沉积过程中的作用及机制。方法:选取C57雌性小鼠40只,随机分为对照组与实验组,实验组分为:慢性睡眠剥夺组（CSD组）、慢性睡眠剥夺+雷帕霉素组（CSD+RAPA组）、慢性睡眠剥夺+3-甲基腺嘌呤组（CSD+3-MA组）,每组10只;实验组采用改良多平台水环境法（MMPM）,小鼠每天被剥夺睡眠20小时,持续剥夺50天
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目的:探究慢性睡眠剥夺对小鼠学习记忆功能的影响;探究自噬在慢性睡眠剥夺小鼠海马Aβ沉积过程中的作用及机制。方法:选取C57雌性小鼠40只,随机分为对照组与实验组,实验组分为:慢性睡眠剥夺组（CSD组）、慢性睡眠剥夺+雷帕霉素组（CSD+RAPA组）、慢性睡眠剥夺+3-甲基腺嘌呤组（CSD+3-MA组）,每组10只;实验组采用改良多平台水环境法（MMPM）,小鼠每天被剥夺睡眠20小时,持续剥夺50天,建立慢性睡眠剥夺模型;剥夺结束前CSD+RAPA组、CSD+3-MA组分别给予雷帕霉素（1mg/kg）、3-MA（2mg/kg）腹腔注射,对照组和CSD组给予等量生理盐水腹腔注射,连续12天;观察4组小鼠一般情况,使用Morris水迷宫系统测试4组小鼠实验干预后行为学上的变化;提取小鼠海马组织后,采用HE染色观察4组小鼠海马组织细胞形态学上的改变;免疫组织化学染色法（IHC）检测4组小鼠海马组织Aβ42、LC3、mTOR、PI3K表达情况;免疫蛋白印迹法（WB）检测4组小鼠海马组织LC3、mTOR、PI3K表达水平。结果:1、小鼠一般情况:对照组较前无明显改变,CSD组、CSD+3-MA组小鼠精神萎靡,食欲减退,毛发光泽度下降,易激惹,CSD+RAPA组小鼠精神状态、食欲方面无明显变化。2、行为学变化:与对照组相比,逃避潜伏期时间明显延长,CSD组[（31.17±8.63）vs（19.15±4.5）,P<0.05]、CSD+RAPA组[（25.87±9.05）vs（19.15±4.5）,P<0.05]、CSD+3MA组[（32.55±9.39）vs（19.15±4.5）,P<0.05];穿越平台次数减少,CSD组[（1.125±0.834）vs（3±1.69）,P<0.05]、CSD+3MA组[（1±0.925）vs（3±1.69）,P<0.05];目标象限停留时间缩短,CSD组[（16.72±8.19）vs（33.8±8.97）,P<0.05]、CSD+RAPA组[（21.25±6.41）vs（33.8±8.97）,P<0.05]、CSD+3MA组[（14.52±2.94）vs（33.8±8.97）,P<0.05]。CSD+RAPA组与CSD+3-MA组相比,其目标象限停留时间延长[（21.25±6.41）vs（14.52±2.94）,P<0.05]。3、小鼠海马组织细胞形态学上的改变:对照组小鼠神经细胞形态完整,边界清晰,排列紧密,细胞结构上无明显损伤;CSD组小鼠神经细胞排列疏松,胞间隙增宽,胞核固缩,胞体变小,细胞数量减少;CSD+RAPA组神经细胞数量减少及核仁皱缩程度轻;CSD+3-MA组神经元排列松散、细胞数量减少较其它3组严重,损伤严重。4、小鼠海马组织Aβ42阳性反应物变化:与对照组相比,CSD组、CSD+3-MA组Aβ42阳性反应物明显增加,CSD+RAPA组增加不明显。5、WB检测小鼠海马组织LC3、PI3K以及mTOR表达量变化:与对照组比较,CSD组、CSD+RAPA组LC3-II/LC3-I升高,P<0.05;CSD+3-MA组升高不明显P>0.05;与对照组比较,CSD组、CSD+3-MA组mTOR表达水平升高,P<0.05;CSD+RAPA组mTOR表达水平下降,P<0.05;CSD+RAPA组与CSD组相比,其mTOR表达水平下降,P<0.05,CSD+3-MA组与CSD组相比,其mTOR表达水平升高,P<0.05;与对照组比较,CSD组、CSD+RAPA组PI3K表达水平升高,P<0.05,CSD+3-MA组升高不明显P>0.05。CSD+3-MA组与CSD组相比,PI3K表达水平下降,P<0.05。结论:1、慢性睡眠剥夺可导致海马神经元形态学改变,促进小鼠海马Aβ42聚集,使小鼠认知功能下降,雷帕霉素可减轻神经元的损害及Aβ42沉积;2、慢性睡眠剥夺可通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控自噬活性,并促进小鼠海马神经细胞自噬活性增强,可能是影响阿尔茨海默病发病及发展的因素。
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