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随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁育领域中的应用,人们对卵母细胞体外成熟给予了极大的关注。近年来,哺乳动物卵母细胞体外成熟技术已取得长足的进步。即便如此,某些动物卵母细胞体外成熟率仍然较低,仍存在许多问题没有解决。目前认为,卵母细胞内在的质量(Intrinsic quality)是影响体外成熟卵母细胞发育能力的主要因素,而卵泡来源(follicular origin)决定着卵母细胞内在质量。在本研究中,我们使用。PMSG、hCG模拟FSH、LH,以性未成熟小鼠为动物模型,利用激素刺激、卵母细胞体外成熟、孤雌激活等技术手段,比较系统的研究了卵母细胞来源,不同培养系统对卵丘卵母细胞复合体类型、卵母细胞染色质构型变化以及对卵母细胞体外成熟的影响。以期为未成熟卵母细胞的选择和成熟培养条件的优化提供理论依据。实验结果如下:
1.卵巢刺激可通过提高卵巢中C<+>型卵母细胞的比例,减少C<->’型卵母细胞的比例促进卵泡和卵母细胞生长发育。
2.卵巢刺激能显著提高不同类型复合体促进SN卵母细胞的比率。
3.卵巢刺激能增强C<+>型及C<->。型卵母细胞细胞核成熟能力,但是对于C<+/->型卵母细胞,刺激卵巢没有提高其核成熟能力。卵巢刺激能提高所有类型卵母细胞体外成熟和孤雌激活的原核形成率。
4.同单独使用hCG或PMSG相比,PMSG/hCG联合刺激卵巢可以提高体外成熟卵母细胞激活后的原核形成率,但是对于卵母细胞细胞核成熟则没有明显影响。
5.对于从自然周期收集的C<+>型卵母细胞,诱导成熟和被动成熟的比率没有明显差异,均显著高于自发成熟的比率。而从刺激卵巢收集的卵母细胞,被动和自发成熟的比率没有差异,均低于诱导成熟的比率。从自然周期获得的C<+/->型卵母细胞,诱导成熟,自发成熟和自发成熟的比率有明显的差异;从卵巢刺激收集的卵母细胞,这三种成熟的比率没有差异。对于C<->型卵母细胞,对于从自然周期或从卵巢刺激收集的卵母细胞,无论是诱导成熟,还是被动成熟,卵母细胞的核成熟的比率均没有明显影响。
6.对于孤雌刺激反应而言,无论是何种类型的卵母细胞成熟18小时后,自发成熟卵母细胞激活后形成原核的比率高于被动成熟的卵母细胞,诱导成熟的卵母细胞的原核形成率显著低于自发和/或被动成熟的卵母细胞。