研究背景：　　 微小RNAs(microRNAs，miRNAs)通过与靶基因的3非翻译区(Untranslatedregion，UTR)以碱基互补配对的方式控制基因的转录和翻译进程。近来，越来越多的文献证实微小RNAs与肝纤维化进程密切相关。有报道显示miR-150可以通过抑制其已知靶点C-myb的表达进而抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的激活及减少细胞外基质蛋白如Ⅰ型胶原的产生。然而，我们发现减少的C-myb表达并不能一一对应由miR-150引起的所有现象。我们推测miR-150对HSCs的抑制可能存在其它潜在的分子机制。　　 目的：　　 本研究通过构建TGF-β1诱导人肝星状细胞LX-2激活的体外模型，观测肝纤维化相关的目的miRNA，即miR-150的表达改变;并进一步确证其与TGF-β1刺激是否存在浓度和时间依赖性。恢复LX-2中miR-150浓度对LX-2是否存在抑制以及细胞外基质的表达改变情况，并最终探讨miR-150抑制TGF-β1激活的LX-2的分子机制。　　 方法：　　 1.研究模型:采用不同的TGF-β1浓度(0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.5 ng/ml和2ng/ml)刺激LX-2，并检测Col1A1的含量确证肝纤维化体外研究模型的建立。　　 2.miR-150的确证:采用real-time PCR法检测不同时间（0h，24h，48h和72h）和不同浓度（0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.5 ng/ml和2 ng/ml）TGF-β1刺激下miR-150表达含量的改变。　　 3.过表达的miR-150对LX-2的影响:分别采用MTT法、ELISA细胞凋亡检测试剂盒检测miR-150模拟物（miR-150 mimics）转染后的LX-2细胞的增殖活力和细胞凋亡率;同时，采用real-time PCR和western blot法检测细胞外基质相关蛋白Ⅰ型胶原和α-SMA的mRNA及蛋白表达改变。　　 4.使用TargetScan Human Release6.2软件预测miR-150的靶基因，并采用荧光素报告基团实验确证。　　 结果：　　 1.体外模型的建立:0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.5 ng/ml和2 ng/ml不同TGF-β1浓度刺激下LX-2的Col1A1含量成剂量依赖性增加(P＜0.05)。　　 2.miR-150的确证:当TGF-β1浓度由0 ng/ml增加到2 ng/ml时，miR-150表达含量为浓度依赖性下调(P＜0.05);当0.1 ng/ml TGF-β1分别作用0h、24h、48h和72h时，miR-150表达含量呈现为时间依赖性下调（P＜0.05）。　　 3.过表达miR-150的影响:随着miR-150含量的恢复，LX-2细胞中Ⅰ型胶原和α-SMA的mRNA及蛋白明显下降(P＜0.05);与对照组相比，miR-150过表达组的增殖率明显受到抑制，仅为62.1％(P＜0.05)，但凋亡率却无任何改变(P＞0.05)。　　 4.利用TargetScan发现miR-150种子序列与Col4A4和Sp1 mRNA的3UTR区可以互补配对，且物种间的保守性较高;构建含待测靶基因Col4A4或Sp1的报告质粒后，与对照组相比，转染miR-150前体组中荧光素活性均明显下调(P＜0.05)。同时，构建含Col4A4或Sp1突变序列的报告质粒，与对照组相比，转染miR-150前体组中荧光素活性并无明显变化(P＞0.05)。　　 5.与对照组相比，在过表达miR-150的LX-2细胞中Sp1的上游通路分子Smad2，p-Smad2，Smad3和p-Smad3均未有改变。　　 结论：　　 1.miR-150存在明显的抗纤维化作用，可以减少LX-2细胞的增殖，但不涉及其凋亡的改变。　　 2.miR-150可以通过其靶点Sp1和Col4A4分别降解Ⅰ型和Ⅳ型胶原含量，而这一过程并未涉及TGF-β/Smads通路的上游分子改变。