长链非编码RNA MEG3在宫颈癌中增殖、侵袭及迁移的作用研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ISE7ENAK
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背景:宫颈癌是女性最常见的生殖道恶性肿瘤,其死亡率位列女性恶性肿瘤中第二位。目前认为持续性感染人类乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌最重要的危险因素,其次宫颈癌的发生还与遗传、免疫、环境等因素有关。宫颈癌患者死亡的主要原因是癌症晚期出现的宫旁侵袭及转移,因此研究感宫颈癌的发生发展机制及寻找有效的治疗靶点,对宫颈癌进行早期诊断,以及预防肿瘤的侵袭转移对于提高患者预后具有重大意义。长链非编码RNA(lncRNAs)是一类转录本长度大于200nt的非编码RNA。lncRNAs在多种肿瘤中表达失调,参与细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭、细胞周期和转移等,通过发挥促癌或抑癌的作用调控肿瘤的发生、发展。其中人母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)是DLK1-MEG3上的一个印记基因,位于人类染色体14q32.3。目前发现lncRNA MEG3基因在多种癌症组织中低表达,是潜在的肿瘤抑制因子。目的:本研究旨在探讨MEG3在宫颈癌组织的表达情况,分析其与临床病理、预后的关系。并在体外过表达MEG3后研究其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:1.收集于2012年07月至2018年12月在广西壮族自治区人民医院妇科接受手术治疗的宫颈癌患者的宫颈组织共68例,另取30例正常宫颈组织作为对照组。运用实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测宫颈组织中MEG3 mRNA的表达情况,并分析MEG3的表达与宫颈癌患者的临床病理参数及预后的关系。2.利用MEG3过表达及干扰MEG3表达的宫颈癌细胞株进行CCK-8实验检测细胞的增殖情况,Trans Well细胞迁移实验检测细胞的迁移能力,Trans Well细胞侵袭实验检测宫颈癌细胞的侵袭能力。3.通过生物信息学预测MEG3与miR-9的潜在结合位点。运用qRT-PCR技术检测上述宫颈组织样本中miR-9的表达情况,随访分析miR-9表达与预后的关系。将宫颈癌组织中MEG3与miR-9的表达情况行统计学相关性分析。体外过表达MEG3后检测其对宫颈癌细胞株中miR-9表达的影响。结果:1.RT-qPcR检测宫颈癌组织中MEG3相对表达量较正常宫颈组织低,两组之间差异具有统计学意义(P1/2及淋巴转移有关(P均<0.05),并且宫颈癌组织中MEG3低表达者较高表达者的中位生存时间更短。2.在细胞功能实验中,过表达MEG3的Hela、Siha细胞的细胞增殖、侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组及空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.生物信息学分析显示MEG3与miR-9有潜在的结合位点,预测miR-9可能是MEG3的靶基因。4.RT-qPcR检测宫颈癌组织中miR-9相对表达量较正常宫颈组织高,差异有统计学意义(P<0.001)。且miR-9高表达患者较低表达者的中位生存时间缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。5.宫颈癌组织中的MEG3与miR-9表达呈负相关关系,相关系数为-0.753,P<0.001有统计学差异。在HeLa、SiHa细胞中过表达MEG3,细胞miR-9的表达降低。结论:1.MEG3 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,其表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及预后有关。2.MEG3可以抑制宫颈癌细胞HeLa和SiHa的增殖、侵袭、迁移能力,可能在宫颈癌中作为抑癌基因起作用。3.生物信息学预测MEG3与miR-9具有潜在结合位点。宫颈癌组织中MEG3、miR-9的表达呈负相关,并与相对立的患者预后有关。体外过表达MEG3后能下调宫颈癌细胞中miR-9的表达。miR-9可能是MEG3的靶点,MEG3可能通过与miR-9竞争性结合调控下游基因表达在宫颈癌发生发展中起作用,但其具体机制还需要进一步研究。
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