拟南芥表皮毛发育异常突变体的基因克隆与功能分析

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiemei2007126
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植物的表皮毛已经被广泛的作为植物细胞发育调控机制的研究模型。为了探索调控植物表皮毛发育的新组分,我们利用正向遗传学的方法在拟南芥突变体库中进行大规模的筛选,发现了四株表皮毛发育明显缺陷的突变体,其中两株的表皮毛均为单分支。通过图位克隆、遗传互补实验,我们证明这两个突变体为STI基因的新等位突变体,且均为隐性突变。STI基因已被报道认为是表皮毛分支调控的关键因子,该基因的表达产物由三个功能域组成,其中间结构域与原核生物DNA聚合酶IIIγ-亚基的序列相似;两个PEST结构域位于N端;另外在该蛋白的N端和C端各有一个细胞核定位信号(NLS)。我们的生化和分子实验证明位于STI N端的第一个PEST结构域对于植物表皮毛分支调控具有重要作用。STI能够与调控细胞形态和核内复制的关键因子BRACHLESS TRICHOME(BLT)作用。以往的研究表明STI调控表皮毛分支的功能发挥与DNA复制、肌动蛋白以及微管细胞骨架的聚合无关,我们的研究结果显示STI和BLT之间存在直接作用的结构域,这一结果揭示出STI在细胞形态建成过程中发挥了某种潜在作用。我们筛选到的另一个突变体其莲座叶上几乎无表皮毛。我们将它命名为F08-01,图位克隆与遗传互补实验证实该突变体是GLABROUS1(GL1)基因的新等位突变体。已知由GL1编码的288个氨基酸组成的蛋白属于R2R3 MYB转录因子。实时定量RT-PCR发现在F08-01突变体中GL1 mRNA表达量显著降低,并且在F08-01突变体中过表达GLI基因能恢复F08-01表皮毛发育缺陷的表型,这表明F08-01是GL1基因的一个新的等位突变体。GL2正向调控表皮毛的发生,属于表皮毛发育上游信号的最后输出装置,本研究从拟南芥莲座叶表皮毛严重缺失突变体gl2-3(SALK039825)EMS诱变库中筛选到一株能够逆转gl2-3表皮毛缺失表型的植株,将其命名为M25-01。M25-01莲座叶上的表皮毛性状与野生型相似,遗传学分析表明在M25-01中可能存在一个与GL2连锁的半显性突变位点。通过对M25-01 GL2位点的分子分析发现导致gl2-3突变表型的T-DNA插入在M25-01中依然存在,但是GL2 mRNA微量表达,说明可能是由于GL2 mRNA微量表达使得M25-01逆转了gl2-3表皮毛缺失的表型。我们的研究结果为进一步克隆M25-01基因及发现可能与GL2互作的新因子奠定了基础。
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