目的:本研究旨在探讨环境中广泛存在的内分泌干扰物2,3,7,8-四氯二苯并-对-二噁英(TCDD)和邻苯二甲酸单(2-乙基己)酯(MEHP)单独以及共暴露对正常人乳腺细胞MCF10A的影响,重点关注TCDD和MEHP对MCF10A在AhR信号通路的相关基因和蛋白表达的影响,以初步探索TCDD和MEHP共暴露对人乳腺细胞MCF10A的毒性作用机制。方法:1.采用MTS方法检测TCDD/MEHP对正常人乳腺上皮细胞MCF10A染毒处理的细胞活性影响。用MTS实验检测1p M、10p M、100p M、1n M、10n M的TCDD染毒处理正常人乳腺上皮细胞MCF10A 24h和48h后细胞活性的影响;或1μM、5μM、10μM、50μM、100μM的MEHP对正常人乳腺上皮细胞MCF10A染毒处理24h和48h后细胞活性的影响;以及1p M、10p M、100p M、1n M的TCDD和100μM的MEHP对正常人乳腺上皮细胞MCF10A共暴露染毒处理24h和48h后细胞活性的影响。2.采用划痕实验的方法检测TCDD/MEHP对正常人乳腺上皮细胞MCF10A迁移能力的影响。3.采用RT-PCR方法检测100μM MEHP单独暴露、1n M TCDD单独暴露、100μM MEHP和1n M TCDD共暴露染毒处理48h后,AhR信号通路相关基因AhR、CYP1A1和迁移侵袭相关基因MMP2、MMP9、VIM、E-Ca的mRNA的表达水平。4.采用RT-PCR和Western Blot方法检测si RNA干扰AhR后100μM MEHP单独暴露1n M TCDD单独暴露、100μM MEHP和1n M TCDD共暴露对AhR、CYP1A1、MMP2、MMP9、VIM、E-Ca基因表达水平的以及AhR、CYP1A1蛋白表达的影响。结果:1.TCDD/MEHP对MCF10A细胞活力的影响,TCDD能降低细胞活力,TCDD与MEHP共暴露也能降低细胞活力。2.TCDD/MEHP对MCF10A划痕实验的影响,TCDD处理48h能够使细胞愈合能力较其他处理组有加快趋势,但无统计学差异。3.TCDD/MEHP对MCF10A迁移相关mRNA以及AhR信号通路相关基因表达水平的影响。TCDD处理组能够增加AhR下游基因CYP1A1基因的表达水平,MEHP与TCDD处理组CYP1A1表达水平较TCDD处理组下降。TCDD处理组能够抑制E-Ca基因表达。4.TCDD/MEHP对干扰AhR后的MCF10A细胞的AhR、CYP1A1基因及蛋白表达水平的影响。AhR基因在si RNA-AhR组较于si RNA-NC组明显下降,TCDD处理组、TCDD/MEHP处理组,si RNA干扰后,si RNA-AhR组较于si RNA-NC组CYP1A1表达量下降且有统计学差异。AhR蛋白在si RNA-AhR组较于si RNA-NC组明显下降,TCDD处理组、TCDD/MEHP处理组,si RNA干扰后,si RNA-AhR组较于si RNA-NC组CYP1A1蛋白表达量下降且有统计学差异。结论:1.TCDD单独暴露,以及MEHP/TCDD共暴露会不同程度的影响细胞活力以及细胞迁移能力的改变。2.TCDD可能通过促进MMP2、MMP9、AhR、CYP1A1基因的表达,降低E-Ca基因的表达进而降低MCF10A细胞活力、增加其迁移能力。3.MEHP可能会通过影响AhR信号通路部分抑制TCDD单独暴露的毒性作用。