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研究目的:
一氧化氮(NO)是活跃的细胞内和细胞间的信号传递分子,广泛地分布于神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统,在机体的生理病理过程中起着重要的作用。它是机体内尿素循环中左旋精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)作用下生成胍氨酸过程中释放出来的无机小分子。由于其半衰期仅有几秒钟,对一氧化氮的研究多通过一氧化氮合酶来进行。已有研究表明,一氧化氮在牙髓牙本质复合体及牙周组织中也起着重要的生理作用。但年龄增长及神经损害对大鼠牙髓、牙周组织中一氧化氮表达的影响,尚未见报道。
本实验拟通过建立动物模型,采用NADPH-d组织化学染色法,研究不同年龄组及神经损害后,一氧化氮合酶在成牙本质细胞及牙周组织中表达的变化,对年龄增长及神经损害可能对一氧化氮功能的影响进行初步探讨,为今后深入研究一氧化氮与成牙本质细胞及牙周组织的病理过程的关系做一些必要的铺垫和前期工作;也为进一步揭示增龄变化对牙髓组织血流调节、牙髓组织损伤时的自我保护和修复、牙髓细胞分化等复杂生理过程影响的具体机制做一些探索。
材料和方法:
1.不同年龄对大鼠成牙本质细胞及牙周组织中NOS表达的影响:选取新生7天、3月龄、8月龄的健康SD雌性大鼠,每组10只。腹腔麻醉下经心灌注处死,手术截取左侧下颌骨磨牙段,常规固定、脱钙,冰冻切片,NADPH-d组织化学染色,光镜下观察并拍片。图像分析。
2.神经损害对大鼠成牙本质细胞及牙周组织中NOS表达的影响:选取健康成年SD雌性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为:对照组(CG)、下牙槽神经切断组(AE)、颈上节神经切断组(SE)、下牙槽神经及颈上节神经切断组(NE)。手术组腹腔麻醉下于左侧行神经切断术,普食喂养14天后,腹腔麻醉下经心灌注处死,手术截取左侧下颌骨磨牙段,常规固定、脱钙,冰冻切片,NADPH-d组织化学染色,光镜下观察并拍片。图像分析。
结果:
1.NOS在7天龄组新生大鼠的成牙本质细胞及牙周组织中呈强阳性表达,其中在牙尖、牙根发育对应的成釉细胞层、成牙本质细胞层及牙周组织等生长发育活跃的区域中的表达较其它区域明显。NOS在3月龄组大鼠的成牙本质细胞及牙周组织中呈阳性表达,成牙本质细胞的表达较明显。NOS在8月龄组大鼠的成牙本质细胞及牙周组织中呈弱阳性表达,部分牙冠及根尖对应处的表达较明显。
2.NOS在对照组的成牙本质细胞及牙周组织呈阳性表达,成牙本质细胞中的表达较牙周组织明显。NOS在AE组的成牙本质细胞表达呈阳性,牙周组织的NOS表达较成牙本质细胞减弱,呈弱阳性。NOS在SE组的成牙本质细胞及牙周组织中呈弱阳性表达。NOS在NE组的成牙本质细胞及牙周组织中呈弱阳性表达。AE组的NOS表达较SE及NE组的NOS表达明显。SE组及NE组的NOS阳性表达无明显差异。
结论:
1.随着年龄增长,NOS在成牙本质细胞和牙周组织中的表达降低,表明年龄增长可能引起NO含量的下降。
2.在新生鼠的牙囊中,NOS在牙尖及牙根等生长发育活跃的区域高度表达,表明NO可能与牙齿发育的活跃程度有关。
3.下牙槽神经、颈上节神经或两者皆切断后,NOS在成牙本质细胞和牙周组织的表达降低,表明神经损害可能引起NO含量的下降。 4.颈上节神经,即交感神经切断后,NOS降低更为明显,表明牙髓牙本质复合体及牙周组织中的NO可能更多地受交感神经调控。